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实验原理
miRNA通过碱基配对结合到靶mRNA的3’UTR区,抑制靶基因的翻译或对靶基因mRNA的降解达到调控基因表达的目的。将靶mRNA的3’UTR区构建至萤火虫荧光素酶报告基因的3’端,与miRNA表达载体及海肾荧光素酶报告基因载体共转染细胞,先后加入两种底物荧光素,通过对荧光素酶报告基因的表达检测确认miRNA对靶基因的调控效果。
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miRNA的qPCR检测
miRNA载体构建及病毒包装
siRNA转染及筛选
miRNA靶点筛选
动植物mRNA提取
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