免疫荧光细胞化学是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光素制成荧光标记物，再用这种荧光抗体(或抗原)作为分子探针检查细胞或组织内的相应抗原(或抗体)。在细胞或组织中形成的抗原抗体复合物上含有荧光素，利用荧光显微镜观察标本，荧光素受激发光的照射而发出明亮的荧光(黄绿色或桔红色)，可以看见荧光所在的细胞或组织，从而确定抗原或抗体的性质、定位，以及利用定量技术测定含量。

青岛菲优特检测有限公司以科学研究为首任，以客户为中心，在严格的程序下开展检测工作，为客户提供专业科学的检验检测、研发分析服务。
 

实验流程

免疫荧光单标记方法

免疫荧光单标记是指只标记一种蛋白质分子，方法比较简单，只要按照染色步骤去做，通常不存在太多的问题。但要注意固定液的选择，固定液选择的合适与否，可能会直接影响染色结果。具体染色方法如下。
 

1、所需材料与试剂

a. 培养在盖玻片或玻璃培养皿中融合程度达到60%-70%的细胞。

b. 一抗、FITC或TRITC标记的二抗。

c. 4%多聚-甲醛固定液或冷丙-酮固定液 (-20℃预冷20 min)。

d. 封闭液。

e. 0.01mol/LPBS缓冲液。
 

2、染色方法

a.取出培养有细胞的盖玻片或glass-bottom培养皿，用0.01MPBS洗2-3遍。

b.加入0.3%的Tritonx-100, 37℃, 30 rain

c. 加入4%多聚-甲醛试问固定30 min或冷丙-酮4℃固定10 min。

d.正常阻断血清1:20封闭试问20-30 min，抑制IgG的非特异性结合。阻断血清必须选择与二抗同一种属的正常血清。

e. 去掉正常血清，直接加入一抗，37℃孵育1 h或4℃过夜。抗体以0.01 mo/LPBS稀释(理想的抗体浓度需经试验而定)。

f. 0.3% TritonX-100洗5 min，0.01 mol/IPBS洗5 min，0.3% TritonX 5 min，0.01 M PBS洗5 rain。

g. 加入FITC-二抗或TRITC-二抗，37℃，孵育1h。

h. 0.3%TritonX-100洗5rain，0.01 mol/LPBS洗5min，0.3% Triton X 5min，0.01mol/LPBS洗5 min，用滤纸吸干。

i. 90%甘油(PBS配制)封片。

j. 激光扫描共焦显微镜下观察，或于4℃避光保存。
 

免疫荧光双标记方法

免疫荧光的双标记是指同时标记细胞内两种蛋白质分子，当怀疑某种配体与已知受体结合后可用此方法加以证明。此方法稍微复杂一些，首先应注意所用的一抗必须是来自不同种属动物的两种特异性抗体(例如：A抗体为多克隆抗体，来自家兔;B抗体为单克隆抗体，来自小鼠)。其次，两种二抗所带荧光素的发射光不应重叠，且尽量远离，通常可以选择FITC和TRITC、Alex488和TRITC、FITC和Cy5，或Cy3和Cy5等来组合。通常情况下，染色时两种一抗可以同时孵育，然后可以同时孵育两种二抗。但当染色结果一种颜色非常弱，而另一种颜色比较强时，应考虑先孵育颜色较弱的二抗。其他步骤同免疫荧光单标记。
 

本平台合作项目

分子诊断、药效学评价、毒理学实验、细胞药筛、动物建模、PDX模型、CRISPR/Cas9基因编辑、病理检测、基因芯片、蛋白组学、代谢组学、高通量测序、ChIP、CO-IP、生物信息学分析、MTT检测、免疫荧光检测、蛋白纯化技术服务、动物模型构建服务、分子量分布检测、磷脂酰丝胆碱检测、虾青素检测!

免疫荧光抗体技术信息由青岛菲优特检测有限公司为您提供，如您想了解更多关于免疫荧光抗体技术报价、型号、参数等信息，欢迎来电或留言咨询。

注：该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案，不可用于临床诊断或治疗等相关用途