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参考报价: | 面议 | 型号: | Southern |
品牌: | 淳风生物 | 产地: | 西安 |
关注度: | 7 | 信息完整度: | |
样本: | 典型用户: | 暂无 |
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一、 实验原理:
Southern blotting是对基因组DNA特定序列进行检测的常用方法,首先提取基因组并利用限制性内切酶消化DNA,在琼脂糖凝胶进行电泳分离,将DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上,经干烤或者紫外线照射固定,再与相对应结构的标记探针进行杂交,用放射自显影或酶反应显色,从而检测特定DNA分子的含量。
具有一定同源性的两条核酸单链在一定的条件下,可按碱基互补的原则形成双链,此杂交过程是高度特异的。由于核酸分子的高度特异性及检测方法的灵敏性,综合凝胶电泳和核酸内切限制酶分析的结果,便可绘制出DNA分子的限制图谱。
二、实验步骤:
1.探针的制备
PCR获取检测探针,标记。
2.核酸样品的制备
动植物组织或细胞抽提出基因组DNA,并使用限制性内切酶将其切断成不同大小的片段。
3.琼脂糖凝胶电泳分离酶切DNA样品
电泳是将DNA样品按片断长短进行分离,然后进行杂交,这样可确定杂交靶分子的大小。
4.转膜与固定
将凝胶中变性的单链DNA通过虹吸法转移到相应的固相载体上,使用高温烘烤的方法使DNA片段固定于膜上。
5.杂交与显影
转印后的滤膜经过预杂交一段时间后,加入标记的探针DNA进行杂交反应。杂交完成后使用酶底物对与标记探针结合的酶联抗体进行显色,烘干拍照。
三、准备材料
实验样品:用于抽提核酸和探针制备的材料:动植物组织;
探针序列信息;
实验数据和参考文献:这将会帮助我们更好地理解您的实验背景,有利于实验的顺利进行。
四、实验结果
实验结果:酶切检测跑胶图片,southern杂交后的结果图片;
实验产物:探针引物及扩增产物、杂交膜。
注:该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案,不可用于临床诊断或治疗等相关用途