qPCR介绍

       实时荧光定量PCR（Real-time Fluorescence Quantitative PCR，RT-qPCR）简称定量PCR（Quantitative PCR，qPCR）。qPCR 是在 PCR技术基础上发展起来的核酸定量技术，在PCR反应体系中加入荧光基团，通过检测荧光信号实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线或者内参基因对未知模板进行定量分析。qPCR可用于mRNA、miRNA、lncRNA和circRNA等的定量检测。
 

qPCR的原理

       qPCR包括染料法和探针法两种。染料法qPCR是利用荧光染料与双链DNA小沟结合发光的理化特征指示扩增产物的增加，如SYBR Green I。SYBR Green I与DNA双链结合时发出的荧光强度是有游离时的1000倍。探针法qPCR是利用与靶序列特异杂交的探针来指示扩增产物的增加，如Taqman探针。Taqman 探针长度为 20-24 bp， 在其 5’末端标记一个荧光报告基团， 3’末端标记一个荧光淬灭基团， 其序列与PCR扩增产物内的一段 DNA完全互补。探针完整时，荧光报告基团发射的荧光信号被荧光淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5’-3’外切酶活性将探针降解，使荧光报告基团和荧光淬灭基团分离，从而淬灭作用被解除， 荧光信号释放。染料法简便易行，成本较低；探针法则由于增加了探针的识别步骤，特异性更高。

qPCR的实验流程
 

1、合成引物、标记探针。
2、提取样品的RNA。
3、检测RNA的浓度和纯度。
4、RNA电泳检测。
5、除去RNA中的DNA。
6、反转录合成第一链cDNA。
7、配置反应液，上机检测。
8、qPCR产物电泳检测。
9、数据分析。
 

qPCR服务的范围
1、可检测的样本包括细胞、组织、全血、血浆、粪便等。
2、可检测的分子包括mRNA、miRNA、lncRNA、circRNA、DNA等。
 qPCR服务的优势1、用primer blast网站设计特异性高的qPCR引物，用oligo 7软件筛选扩增效率高，不形成二聚体或者发夹结构的qPCR引物。一对qPCR引物中至少一条跨外显子结合区，排除DNA的干扰。
2、qPCR产物电泳确保没有二聚体或者发夹结构。
3、完整、真实的原始数据，并且进行专业的数据分析。
4、完整的实验报告，包括RNA电泳图、扩增曲线、溶解曲线、qPCR产物电泳图、原始数据、数据分析表、柱形图等。 qPCR的结果示例

RNA电泳图



扩增曲线



 溶解曲线



qPCR产物电泳图
 

qPCR服务说明
 

1、客户提供样品。
细胞≥10^5个，组织≥100 mg（黄豆粒大小），全血≥0.5 mL，血浆≥2 mL，基因组DNA≥5 μg。检测指标多余10个需要提供更多样品。
建议所有样本干冰寄送，保持低温环境，保证样本质量。
2、HYY提供RNA电泳图、扩增曲线、溶解曲线、qPCR产物电泳图、原始数据、数据分析表、柱形图和说明实验过程中所用的耗材、仪器设备、实验方法的实验报告一份。
3、实验周期1～2周。样品和指标较多适当延长实验周期。

 

qPCR检测服务信息由广州辉园苑医药科技有限公司为您提供，如您想了解更多关于qPCR检测服务报价、型号、参数等信息，欢迎来电或留言咨询。

注：该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案，不可用于临床诊断或治疗等相关用途