细胞自噬(autophagy or autophagocytosis)：又称为Ⅱ型细胞死亡，是细胞在自噬相关基因(autophagy related gene，Atg) 的调控下利用溶酶体降解自身受损的细胞器和大分子物质的过程。自噬作为时下的研究热点，有非常深远的研究意义。拓普生物在自噬研究方面具有丰富的经验，我们可以为您提供从课题设计-实验操作-实验结果-数据分析的整体解决方案。



细胞自噬形态学特征的检测方法
1）透射电镜观察自噬体。
自噬体是自噬的标志性结构。自噬体属于亚细胞结构，直径一般为300～900nm，平均500nm，普通光镜下看不到。通过透射电子显微镜发现自噬体一直是观察自噬现象最直接、最经典的方法，是自噬检测的“金标准”。

2）荧光显微镜下采用GFP-LC3融合蛋白来示踪自噬形成。


 

由于自噬体膜形成过程中需要LC3，因此通过标记LC3可以识别自噬体。
3）荧光染色法
用荧光染料对组织切片或细胞进行染色观察自噬的发生。晚期自噬体与溶酶体融合而呈酸性，根据这个特点可用酸向性染料MDC等和Lyso Tracker标记自噬溶酶体。


 

自噬标志性蛋白
1）自噬标记蛋白LC3
2）细胞自噬底物蛋白的检测
3）Atg12-Atg5复合体
4）Beclin1 
5）自噬相关的标志性蛋白还包括ATG1、ATG9、DRAM1、ATG14、ATG16以及 ATG18等。
 

自噬的调控通路

1）依赖mTOR（哺乳动物雷帕霉素靶点）途径的自噬

A．PI3K-AKT-mTOR信号通路
 B. AMPK-TSC 1/2-mTOR 信号通路

2）其它的信号通路

A. 3-甲基腺嘌呤（3-MA）通过抑制Class ⅢPI3K的活性抑制自噬；

B. beclin1和UVRAG作为正调控子，抗凋亡因子bcl-2作为负调控子共同参与组成ClassⅢPI3 复合物调控自噬；

C. GTP结合的G蛋白亚基Gαi3抑制自噬；GDP结合的Gαi3蛋白活化自噬；

D. 死亡相关蛋白激酶（death-associated proteinlinase,DAPK）和DAPK相关蛋白激酶（DAPK-related protein kinase-1,DRP-1）诱导自噬。

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