实验方法> 生物化学技术> 化学生物学实验技术>酵母细胞RNA的提取与沉淀分离

酵母细胞RNA的提取与沉淀分离

关键词: 酵母细胞 rna 提取 沉淀分离来源: 互联网

相关专题   一、原理:酵母细胞置于含有SDS的缓冲溶液中,加等体积的苯酚水溶液,通过激烈振荡一段时间,将RNA和蛋白质分开,然后离心分层,RNA溶于上层水溶液中,DNA和蛋白质在酚相。RNA可用乙醇沉淀析出。 二、材料与试剂:新鲜湿酵母、SDS-Tris缓冲液(0.3%SDS,0.01MMgCL2 ,0.1MTris,用HCL调至PH7.2)、苯酚水溶液(90%,W/V)、20%乙酸钾水溶液、95%乙醇 三、操作方法 1、取10ml酵母浓缩液(约5g左右湿酵母),加入4mlSDS-Tris缓冲液,再加入6ml90%苯酚水溶液。 2、在室温激烈振荡1h,然后冷却至0-4℃,以下操作均在0-4℃进行。 3、上述提取液以4000r/min,离心5min。 4、分离出上层水相加入1/10体积的乙酸钾溶液,再加入2倍体积的95%乙醇。在-16℃作于放置使RNA沉淀析出。此沉淀可在冰箱中长期保存。

推荐方法

Copyright ©2007 ANTPedia, All Rights Reserved

京ICP备07018254号 京公网安备1101085018 电信与信息服务业务经营许可证:京ICP证110310号