目的研究SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）显示小分子多肽的方法.方法　观察不同方法处理的样品，上样量对电泳结果的影响及对分子量标准（Mr2512～16949）进行直线回归分析.结果　样品的不同处理条件未见有差异；在该实验系统条件下上样样品为每孔5～10μg较佳；分子量标准直线回归系数r=-0.962.结论　样品处理方便；上样量少；在160 g?L-1 T，60 g?kg-1 C较低的丙烯酰胺含6 mol?L-1脲的分离胶中能够显示Mr为2512的多肽，是一种显示小分子多肽的较好方法.
　　关键词：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳；肽；蛋白质
　　0　引言
　　20世纪60年代Shapiro建立了SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）方法之后，Weber，Glossmann和Douglas等人进行了多次改进，已显示出了在分离、鉴定和纯化蛋白质方面的优越性，但对于Mr小于10000的蛋白质来说是无能为力的［1］. 20世纪80年代初Sch%26auml;gger等［2］应用脲分离蛋白质复合体亚单位的11种蛋白质，但分离效果不甚理想且重复性较差.之后他们又进行了系统地研究和摸索，能够分离较大Mr范围内的蛋白质.随着生物技术的飞速发展和基因工程药物的大量涌现，具有高生物活性的小分子多肽的分离、纯化和鉴定已显得尤为突出.我们在进行基因工程药物的开发研制中，对SDS-PAGE方法进行了多次改进，在较低的丙烯酰胺浓度下取得了理想的结果.此法所需仪器简单，操作方便，重现性好，时间短，只需微克量的多肽便可显带且能迅速估计出其Mr，值得进一步推广和利用.
　　1　材料和方法
　　1．1　试剂和仪器　SDS、脲、甘油、过硫酸铵均为分析纯,阴离子，西安化学试剂厂出品,阳离子聚丙烯酰胺；丙烯酰胺（分析纯）为汕头市光华化学厂产品；N，N′-甲叉双丙烯酰胺（分析纯）为浙江黄岩人民化工厂生产； tris（分析纯）为成都试剂厂出品；TEMED为BIO-RAD产品；Tricine(Ultra pure Grade)为Solon Ind产品. BIO-RAD小型垂直式电泳附件模具；FD-201稳压稳流电泳仪（上海医用分析仪器厂）.
　　1．2　肽分子质量标准　肽分子质量标准的Mr范围2512～16949为Pharmacia lKB 公厂产品. 胸腺肽α1是美国加州圣马刁市赛生药品公厂产品（商品名“ZADAXIN”），是一乙酰化的多肽，Mr为3108， pI 3.8. 经 Sephadex G-25柱去除所含的甘露醇，然后冷冻干燥，用样品缓冲液配成所需样品.
　　1．3　方法
　　1．3．1　电泳贮存液的配制　阳极缓冲液中Tris为0.2 mol?L-1用HCl调pH值至8.9.阴极缓冲液为0.1 mol?L-1 的Tris， 0.1 mol?L-1的Tricine和0.01 g?L-1的SDS溶液，其pH值约为8.25. 胶缓冲液为3.0 mol?L-1的Tris和 0.03 g?L-1的SDS，用HCl调pH值至8.4.
　　称取48 g丙烯酰胺和1.5 g N，N′-甲叉双丙烯酰胺溶于100 mL纯水中，溶解混匀后经4号滤纸过滤即得到495 g?L-1 T，30 g?kg-1 C的贮存液；称取46.5 g丙烯酰胺和3.0 g N，N′-甲叉双丙烯酰胺溶于100 mL纯水中，同样得到495 g?L-1 T，60 g?kg-1 C的贮存液（T代表丙烯酰胺的总浓度，C代表交联度）.
　　1．3.2　胶的制备　与一般SDS-PAGE电泳相似［3］，按Tab1给出的数据分别配制分离胶、间隙胶和浓缩胶，依次灌胶.
,阳离子; 1．3.3　样品缓冲液的制备及样品的处理　蛋白质样品与上样缓冲液（4 g?L-1 SDS，120 g?L-1甘油，50 mol?L-1 tris，20 mL?L-1巯基乙醇含0.1 g?L-1溴酚蓝，pH6.8）混合均匀，分别按40 ℃孵育30 min；60 ℃孵育10 min和煮沸2 min处理.
　　1．3．4　电泳条件　内槽装阴极缓冲液、外槽用阳极缓冲液恒压电泳，先40 v约1 h，当样品进入分离胶时，电压升至60 V约2 h.
　　1．3．5　染色、脱色和胶的保存　电泳完毕时胶置于染色液［2.5 g?L-1考马斯亮蓝R-250的乙醇（V）∶冰乙酸（V）∶水（V）为9∶2∶9］中振荡染色1.5～2 h，转至脱色液（400 mL?L-1的乙醇，40 mL?L-1的冰乙酸）中扩散脱色，直到背景清晰.胶的保存与一般SDS-PAGE类同［3］.
　　2　结果
　　2．1　不同处理的样品对SDS-PAGE的影响　多肽样品经上述3种不同处理，经SDS-PAGE后，分子质量蛋白标准（Mr2512～16949）没有电泳差异，均能较清晰地显示6条带（Fig 1）.分子质量蛋白标准分别在每孔上不同量的蛋白质（Fig 2），当上样量为1μg时，分子质量蛋白标准仅能显示其中的5条带.当上样量达到5～10 μg时，Mr 2512的肽带明显可见.
　　2．2　分子量标准蛋白回归方程及对低分子量标准品的分析　应用160 g?L-1T，60 g?kg-1C含6 mol?L-1脲的丙烯酰胺凝胶能够较好地显示标准蛋白的6条带（Fig1）. 对其Mr对数（lgMr）和在分离胶中迁移的距离（&mu,丙烯酰胺;）进行直线回归分析，回归方程为 =-0.0378x + 4.5512，相关系数r = -0.962，从曲线查及胸腺肽α1单体的Mr为3135（其理论Mr为3108）.