聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）实验方法总汇

非变性凝胶电泳 ,也称为天然凝胶电泳,可以使生物大分子在电泳过程中保持其天然的形状和电荷,它们的分离是依据其电泳迁移率的不同和凝胶的分子筛作用,与变性凝胶电泳最大的区别就在于蛋白在电泳过程中和电泳后都不会变性.最主要的有以下几点:

1. 凝胶的配置中非变性凝胶不能加入SDS,而变性凝胶的有SDS.

2. 电泳载样缓冲液中非变性凝胶的不仅没有SDS,也没有巯基乙醇.

3. 在非变性凝胶中蛋白质的分离取决于它所带的电荷以及分子 大小,不像SDS-PAGE电泳中蛋白质分离只与其分子量有关.

4. 非变性凝胶电泳中,酸性蛋白和碱性蛋白的分离是完全不同的,不像SDS-Page 中所有蛋白都朝正极泳动.非变性凝胶电泳中碱性蛋白通常是在微酸性环境下进行,蛋白带正电荷,需要将阴极和阳极倒置才可以电泳.

5. 因为是非变性凝胶电泳,所有的电泳时候电流不能太大,以免电泳时产生的热量太多导致蛋白变性,而且步骤都要在0-4度的条件下进行,这样才可以保持蛋白质的活性,也可以降低蛋白质的水解作用.这点跟变性电泳也不一样.所以与SDS-PAGE电泳相比,非变性凝胶大大降低了蛋白质变性发生的机率.