【实验目的】

1. 掌握肝糖原提取的原理和方法。

2. 掌握定性比较饱食和饥饿家兔肝糖原含量的原理和方法。

【实验原理】

糖原是葡萄糖在机体内的重要储存形式之一。主要储存在肝细胞和肌细胞内，分别称为肝糖原和肌糖原，其中肝糖原储存量约占肝重的5％，肌糖原储存量约占肌重的2％~3%。肝糖原储存量虽不多，但在代谢过程中，它是机体内糖的重要来源之一。其合成或分解对血糖浓度的调节起着重要作用。许多因素可影响肝糖原的含量。如饱食后肝糖原增加，饥饿时肝糖原逐渐降低。

提取糖原是将新鲜的肝组织与石英沙及三氯醋酸共同研磨，当肝组织充分破碎后，其中的蛋白质被三氯醋酸所沉淀，而糖原仍留于溶液中。过滤除去杂蛋白。糖原不溶于乙醇，在上清液中加入乙醇溶液，糖原从溶液中沉淀析出。糖原是高分子化合物 (分子量约400万)，微溶于水，将离心后沉淀的糖原溶于水，溶液呈乳样光泽，即为糖原溶液。糖原无还原性，遇碘呈红棕色，经酸水解可生成还原性的葡萄糖。将糖原溶液的一部分作碘的颜色反应，另一部分经酸水解成葡萄糖后，用斑氏(Benedict) 试剂 检验。利用上述性质，进行饱食与饥饿家兔肝糖原的比较。

【器材和 试剂 】

1. 器材 匀浆机、 离心机 、台秤、 试管 及 试管 架、烧杯、水浴锅、白瓷板。

2. 试剂

（1）5%三氯醋酸溶液。

（2）0.3%碘液。

（3）95%乙醇。

（4）20%NaOH溶液。

（5）浓盐酸溶液。

（6）班氏定性试剂。

【操作步骤】

1. 在 匀浆机 中加入适量5%三氯醋酸溶液。

2. 将家兔（饥饿和饱食）快速杀死，剖腹取出肝脏，迅速以滤纸吸去附着的血液后，将饥饿和饱食家兔肝脏分别放入 匀浆机 制备肝匀浆（因为肝脏离体后，肝糖原会迅速分解。因此在杀死动物后，所得肝脏必须迅速以三氯醋酸处理以防分解）。

3. 沉淀，过滤，弃去杂蛋白，滤液分别收集于烧杯中备用，观察并比较两种溶液浑浊程度。

4. 分别于饥饿和饱食家兔肝匀浆滤液中取滤液4ml，加入等体积95%乙醇，充分混匀后，离心3min（3000r/min），比较两管糖原沉淀量。

5. 小心倾去上清液，于每管各加入蒸馏水5ml，加温，至沉淀溶解，即为糖原溶液。

6. 取试管3支，编号，按下表操作：

混匀，观察并记录颜色，进行比较。

7. 取试管2支，各加入饥饿家兔或饱食家兔肝糖原溶液2ml，每管加入浓盐酸10滴，置沸 水浴 中水解约10min，取出冷却，然后用20%NaOH中和（约20滴），此即为肝糖原水解液。

8. 取试管3支，编号，按下表操作：

混匀，置沸 水浴 中3min，观察记录颜色及沉淀量。

【思考题】

1.在杀死实验动物后，离体肝脏为什么要迅速用三氯醋酸处理?

2.在提取肝糖原实验中，使糖原从溶液中沉淀析出应添加什么试剂?