小鼠卵白蛋白 特异性IgG 抗体 ( OVA-sIgG ) 酶联免疫 分析（ ELISA ）

试剂 盒使用说明书

本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定小鼠血清，血浆及相关液体样本中 卵白蛋白 特异性IgG抗体(OVA-sIgG) 含量。

实验原理 ：

本试剂盒应用 双抗原 夹心法测定 标本 中 小鼠卵白蛋白 特异性IgG 抗体 ( OVA-sIgG ) 水平。用纯化的 卵白蛋白 特异性IgG ( OVA-sIgG ) 抗原 包被微孔板，制成固相 抗原 ，往包被 抗原 的微孔中加入 卵白蛋白 特异性IgG ( OVA-sIgG ) ，再与HRP 标记的 卵白蛋白 特异性IgG ( OVA-sIgG ) 抗原 结合，形成抗原- 抗体 - 酶标抗原复合物 ，经过彻底洗涤后 加 底物TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 卵白蛋白 特异性IgG ( OVA-sIgG ) 呈正相关。用酶标仪在 450 nm波长下测定吸光度（ OD 值）， 通过标准曲线 计算样品 中 小鼠卵白蛋白 特异性IgG ( OVA-sIgG ) 的浓度。

试剂盒组成 ：

样本处理及要求 ：

1.血清：室温血液自然凝固 10-20 分钟，离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2.血浆：应根据标本的要求选择 EDTA 、者柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合 10-20 分钟后，离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3.尿液：用无菌管收集，离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用 PBS （ PH7.2-7.4 ）稀释细胞悬液，细胞浓度达到 100 万 /ml 左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的 PBS ， PH7.4 。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持 2-8 ℃的温度。加入一定量的 PBS （ PH7.4 ），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

操作步骤