传代步骤比较传统：

倒掉培养液－>PBS洗2遍－>胰酶0.25%消化－>倒掉胰酶－>加培养基－>用吸管吹打均匀－>分瓶－>放置37度，5%CO2孵箱。

我的体会是：

1、消化时间和实验环境温度也有很大关系，我们实验室条件比较差，不能维持恒温（不过我想大部分实验室目前也还是做不到的）。夏天的时候，消化特别快。但是到了冬天，就很慢，要用手捂老半天。

2、消化到什么程度可以，经验很重要，如果每瓶消化都要通过显微镜观察来判断，首先效率太低，而且还很容易消化过头。对光观察培养瓶，当感觉到有些泛白，瓶角有少许细胞脱离的时候就可以了，倒掉消化液，用手轻拍培养瓶就能脱离了。

3、一般培养的时候，就用5%的小牛血清，只有刚传代的时候才用10％的。感觉这样，细胞不会长的特别快，3-4天换一次液完全没有问题。