仪器用具：

37℃培养箱及冰浴

Electroporation cuvette （electrode gap, 0.1 cm）

Electroporator （Bio-Rad, IBI geneZapper 或其它厂牌）

药品试剂：

无菌水 （置冰浴中）

10% glycerol （置冰浴中）

SOB 液体培养基

SOB 固体培养基

SOC 液体培养基

SOC/Amp 固体培养基

大肠杆菌JM109

Ligation mixtures

方法步骤：

菌体的处理：

1） 进行转形实验的前16~20 h,将菌种JM109 接种在SOB 固体培养基上，并在37℃培养箱中培养。

34 Methods in Biotechnology Vol 1

2） 取80 mL SOB培养基装入250 mL灭过菌的三角瓶。 另取1 mL SOB加于微量离心管中。由SOB固体培养基上选8 个约2~3 mm大小的单一菌落接入1mL SOB中，震荡将菌体打散后，加入80 mL SOB中，于37℃震荡培养约2~3h,直至细胞数约为4~7×107/mL.

3） 收集菌液于离心管中，置冰浴中10 min.

4） 以750~1,000 g 离心12~15 min （4℃）。

5） 倒去上清，并尽量将液体倒干，或以微量移液器头吸干净。

6） 沉淀加入80 mL 冰冷的无菌水，稍加震荡，混合均匀后以750~1,000 g 离心12~15 min （4℃）。

7） 倒去上清，菌体再依序以40 mL 及1.6 mL 无菌水同法处理。

8） 菌体以0.16 mL 冰冷的10% glycerol 悬浊。

9） 菌液每80 μL分装一管，可直接用于electroporation,或以液态氮或干冰快速冻结后置 -70℃贮存。