问：

构建逆转录病毒为载体的DNA（质粒），阳离子脂质体2000（过期的），转染病毒包装细胞pt67，G418筛选，在换液和传代过程中均会有细胞死亡（贴壁细胞漂浮）。求教原因。

换液3.6ml DMEM+0.4ml新生牛血清+24μlG418

传代用胰酶ph 7.2，1ml，用0.3ml新生牛血清中和，800rpm离心5min，弃上清，加入上述培养液。

答：

做一下G418浓度筛选，另外你的对照组未转染的细胞经同样浓度G418筛选后怎样呢？是否本来细胞状态不好？或是根本没有转进去呢？还有就是脂质体本身对细胞就会产生一定的毒性，综合几个方面再做一次转染试试看！我们做转染时候通常G418都是作梯度筛选的。