（1.北京市农林科学院畜牧兽医研究所，北京100089；2.北京农学院动物科技系，北京102206； 3. 新疆农业大学动物医学学院，新疆乌鲁木齐830052）
摘 要：利用碳化二亚胺（EDC）法将氨苄青霉素(Ampicillin，AMP)与匙孔嘁血蓝蛋白（mcKLH）偶联制备免疫原免疫Balb/c小鼠，应用杂交瘤技术将免疫鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞（SP2/0）融合，建立分泌氨苄青霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株。同上方法将氨苄青霉素连接到阳离子化的牛血清白蛋白（cBSA）上制备检测抗原，对AMP-KLH偶联物免疫小鼠产生的抗体进行检测。通过对杂交瘤细胞培养上清的检测、鉴定，筛选出8株高亲和力的杂交瘤细胞株，用其制备的腹水ELISA效价达到2×10 ⁶ ，纯化后的单克隆抗体（McAb）可以应用于氨苄青霉素残留的快速检测。
关键词：氨苄青霉素；单克隆抗体；酶联免疫吸附试验 
青霉素类药物是历史上最悠久的抗微生物药物，同时也是品种最多和最重要的一类抗生素。目前仍是动物和人类最常使用的抗生素之一。其作用机制是抑制细菌黏肽转肽酶的活性，阻止细胞壁的形成，从而呈现很强的杀菌活性。青霉素类药物的结构特点是含有β-内酰胺环母核,在动物疾病的预防和治疗中,应用较为广泛，如用于控制奶牛的乳腺炎，治疗尿道、生殖道、胃肠道和呼吸道感染。随着青霉素类药物的广泛应用，也带来一些诸如过敏反应和耐药性等副作用，因而许多国家对动物使用青霉素类药物和动物食品中青霉素类药物的残留实行严格的监控措施。
关于青霉素类药物残留的分析方法已有大量报道，由最初的微生物生长抑制试验，发展到比较灵敏的仪器分析法 ^[1-3] 。目前比较常用的方法主要包括高效液相色谱法（HPLC）、免疫分析法和微生物测定法，其中HPLC灵敏、高效，为目前国际上通用的方法，但需要特殊的检测仪器，微生物测定法非常简便，一般实验室均可应用，因而目前使用非常广泛，但其灵敏度不高。免疫分析法是将抗原抗体反应与灵敏的检测系统结合而成的一种简便、快速、敏感的分析方法，目前虽刚起步但具有广阔的应用前景 ^[4] 。近几年也发展出一些新的检测方法如毛细管电泳法 ^[5] 和青霉素受体蛋白试验 ^[6] ，结果也能达到最大残留限量（MRL）标准，但未被广泛使用。目前国内对青霉素残留的检测几乎都是借鉴国外的HPLC方法 ^[7] ，而使用青霉素单克隆抗体的免疫学方法检测青霉素残留尚未见报道。本研究旨在应用杂交瘤技术建立能稳定分泌抗氨苄青霉素（AMP）单克隆抗体的杂交瘤细胞株，为下一步建立氨苄青霉素快速检测方法奠定基础。
1 材料与方法
1.1 材料
氨苄青霉素(AMP)、牛血清白蛋白（BSA）、弗氏佐剂、PEG溶液、辣根过氧化物酶（HRP）标记的羊抗鼠IgG,HAT和HT溶液购于Sigma公司；DMEM低糖干粉培养基、优等胎牛血清，购于Hyclone公司；EDC偶联试剂盒购于Pierce公司； Balb/c小鼠购于军事医学科学院实验动物中心；SP2/0骨髓瘤细胞为北京市农林科学院畜牧所高技术实验室保存。