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1.细胞爬片;

2.4%多聚甲醛固定10min(固定细胞器 用预冷的70%甲醇+30%丙酮);

3.PBS 漂洗5min;

4.0.5% Triton 穿孔15min(丙酮固定法不用透化处理);

5.PBS 漂洗2次，每次5min;

6.1%BSA 封闭30min;

7.加入1%BSA 稀释的一抗，于37℃杂交2h;

8.PBS漂洗2次，每次5min;

9.加入1%BSA稀释的二抗，于37℃杂交1h;

10.PBS漂洗2次，每次5min;

11.5ug/ml DAPI染色2min;

12.抗淬灭封片剂封片。

抗淬灭封片剂:

2.5% DABCO (w/v)

50mM Tris(pH8.0)

90%甘油