问：

手上有U251细胞，pEGFP载体，现在将不带外源基因的载体转u251的效率都很低，10%都没有。

所用转染试剂：invitrogen的Lipofectamine 2000和威格拉斯的Vigofect，效率都很低，试过不同细胞密度，不同的DNA和转染试剂的比值，还是不行。

各位高人有没有什么建议，另外转染的时候使用有血清的培养基养细胞，不知道影响大不大（说明书上说没有影响），稀释DNA和转染试剂是无血清的培养基，还有就是细胞是很久以前的了，传代较多不知道行不行。

答：

lipo最好是用optiDMEM，不过我没用过，感觉也可以。

建议你转染时用无血清培养液，我是转染前半小时把细胞换无血清培养液孵育，然后lipo和质粒同体积分别和无血清培养液混匀10min后，再混匀30min，加入细胞。5h后换回正常培养液。

细胞密度要控制好，状态要好，可以在传代后1-2天，这样密度状态都比较好。

lipo不可冻

用无血清培养液

具体孵育时间视细胞而定，但感觉如果5h转不进，估计很麻烦。当然我有个同学还孵育一夜的，因为细胞抵抗力强，根据细胞调整。