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人的外周血淋巴细胞培养 及染色体标本制备

【实验目的】 　 掌握人体外周血离体培养制备染色体 标本的方法。【实验原理】 　　 人外周血中的小淋巴细胞几乎都在G1期或G0期，一般情况下是不分裂的。当在离体培养条件 下加入植物 凝血素（PHA），小淋巴细胞受刺激转化为淋巴母细胞，随后进入有丝分裂。 经过短期培养，秋水仙素的处理，低渗和固定，就可获得大量的有丝分裂细胞。【实验材料和用品】 　　1、材料：人外周血淋巴细胞 　　2、用具：注射器、离心管、吸管、试管架、量筒、 培养瓶、酒精灯、烧杯、载波片、切片合、天 平离心机、恒温培养箱、显微镜。 ? 使用的玻璃器皿在洗液中浸泡过夜，再用流水 冲洗过夜，捞起沥干，过三次蒸馏水后凉干， 干热间歇消毒或高压消毒。直接与培养细胞接 触的器皿，最后一过宜用双蒸水。橡胶制品不 能用洗液浸泡，应用1%钠溶液煮沸半小时以 上，流水冲洗后，高压消毒。 　　3、试剂药品 　　① RPMI1640培养基，含有20种氨基酸，维生 素，生物素，碳水化合物，无机 　　② 凝血素（PHA）激活细胞分裂 　　③ 青霉素、链霉素为广谱抗生素 　　④ 小牛血清，促进细胞繁殖和维持PH值 　　⑤ 肝素，主要起抗凝血作用 　　⑥ 秋水仙索，使细胞分裂停止在分裂中期 　　⑦ 固定液，使血清蛋白、核蛋白凝固 　　⑧ 姬姆萨染液，使染色体染色。【实验步骤】 　　1、培养基的配制 　　2、采血培养 　　3、秋水仙素处理 　　4、收采淋巴细胞及制片 　　【制片步骤 】 　　吹打成悬浮转入离心管加少量生理盐水洗瓶顷入离心管 → 离心 1000 转 / 分 8min → 去上清液，加入温育蒸馏水 6ml 吹打成悬液，置 37 ℃中低渗 25min → 加入固定液 1ml → 离心， 1000 转 / 分 8min → 去上清液，加固定液 6ml, 吹打，静置 15min → 离心， 1000 转 / 分 8min → 去上清夜，加固定液 6ml 吹打 , 静置 15min → 离心， 1000 转 / 分 8min → 去上清夜，加固定液 0.5ml 吹打至细胞成悬液 → 高空滴入冰玻片上 , 边滴边吹 → 用酒精灯烤干，贴标签，放于玻片盒里凉干待用 　　用3瓶的一管做G带滴8片， 2瓶的一管做SCE滴5片. 标签分别为： G 姓名：S 姓名：【相关图片 】