骨髓基质干细胞的诱导分化 1.成软骨诱导骨髓基质干细胞培养7天后，加入软骨诱导液，诱导因子终浓度为TGF-p1 10ng/m1、IGFl00ng/m1、地塞米松0.1/1m01/L，转铁蛋白6.25ug/ml，诱导时间为2-4周。 2.成骨诱导(1)骨髓基质干细胞培养7天后，加入成骨诱导液。诱导液成分为基础培养液加入10mmo]/Lβ-磷酸甘油、10nmol/L维生素D3等诱导成分。(2)特殊染色vonKossa染色：诱导4周，4％多聚甲醛室温固定30rain，蒸馏水冲洗，加入1％(W/V)硝酸银溶液，避光30min，加入0.1mmol/L硫代硫酸钠1h，蒸馏水冲洗，干燥封片。矿化结节呈现黑色。设诱导组、非诱导组、柠檬酸处理组。此方法用于特异性检测钙化结节形成能力。AlizarnRed染色：诱导3～4周，4％多聚甲醛室温固定30min，蒸馏水冲洗，加入0.1％AlizarnRed-Tris-HCL溶液(pH 8.3)，室温10min。蒸馏水冲洗，干燥封片。钙盐沉积处呈红色。 3.成脂肪诱导(1)骨髓基质干细胞培养7天后，吸去培养液，PBS轻轻冲洗后，加入成脂肪诱导液，其成分为基础培养液和0.5mmol/LIBMX、1umol/L地塞米松、10umol/L胰岛素、200/~mol/L吲哚美辛等，每4天更换培养液。倒置显微镜观察细胞形态的变化(有无脂滴形成)。(2)特殊染色油红染色：诱导2-3周进行油红染色，以观察细胞脂滴形成情况。染色前，细胞经4％甲醛4~C固定1h，70％异丙醇清洗，2％油红试剂室温放置5-10min，?0％异丙醇洗去多余的染料，蒸馏水洗涤，苏木精染色2rain。染色过程中，细胞绝对不要脱离液体环境超过30s，否则实验很难成功。