实验概要 提取样品组织中的RNA并消除DNA污染 实验原理 Trizol裂解细胞使RNA释放 beta巯基乙醇一直RNase活性 酚-氯仿抽提分离RNA RNase-Free DNase消除DNA污染 主要 试剂 Trizol 无水乙醇 氯仿（三氯甲烷） 异丙醇 RQ1 RNase-Free DNase（Promega，M6101） 液氮 RNase-Free water 醋酸钠缓冲溶液（3M，pH5.2） 主要设备 离心机 研钵 热块 离心机 实验材料 组织样品 实验步骤 组织中total RNA的提取 取适量组织（约30mg）于研钵中加入液氮研磨，研碎后转移至EP管中； 向样品中加入1mL Trizol，吹匀，放置5min； 向上述EP管中加入200μL氯仿，剧烈震荡15s，室温放置3min，4℃12000rpm离心15min； 取上层水相500μL于新的EP管中（注意不要吸入沉淀），加入100μL氯仿，剧烈震荡15s，室温放置3min，4℃12000rpm离心15min； 取上层水相400μL于新的EP管中（注意不要吸入沉淀），加入400μL异丙醇，室温放置10min，4℃12000rpm离心10min； 弃上清，加入1mL 75%乙醇洗涤，轻弹混匀，4℃7500rpm离心5min； 20μL RNase-Free Water溶解RNA； 紫外测定RNA浓度，记录A260/280，， 琼脂 糖电泳鉴定RNA质量。 Total RNA中DNA的 DNA消化体系（100μL） RNA样品：10mg（量不足可适量减少） RQ1 DNase 10* Reaction Buffer：10μL 补水至100μL 如体系加好样品，37℃孵育30min； 向体系中加入100μl DEPC水； 加入100μl氯仿，震荡混匀，室温放置10min； 4℃13200rpm离心15min，吸取上层清夜150μl转移至新的EP管中； 加入0.1倍体积（15μl）NaAc Buffer及等体积（150μl）异丙醇，室温沉降30min； 4℃13200rpm离心15min，弃上清，75%乙醇洗涤沉淀； 4℃12000rpm离心5min，弃上清，开盖放置晾干乙醇； 20μl RNase-Free水溶解RNA； 紫外测量浓度及A260/280，1.5% 琼脂 糖电泳检测RNA状态。 注意事项 所用工具均经高温灭菌 EP管、枪头经DEPC处理 实验地点尽量选择空气流动较少，实验时带口罩等。