DNA模板浓度的检测
- 实验目的
了解紫外分光光度计检测的原理。检测所提取DNA模板的浓度。 二、实验原理 若OD 260 /OD 280 比值大于2.0,说明存在RNA。可再用RNA酶处理。酚-氯仿-异戊醇(25;24:1)提取,乙醇沉淀和洗涤DNA。 若OD 260 /OD 280 比值小于1.80,说明存在蛋白质或酚等杂质。可用CTAB提取液消化3小时,重新用酚一氯仿一异戊醇抽提,除去蛋白质等杂质,直至比值接近1.80。 若OD 260 /OD 280 比值等于1.80,小于2.0说明所提DNA非常纯净。 三、实验器材 紫外分光光度计 比色杯 移液枪 四、实验试剂 DNA模板 0.1XTE 五、实验操作 1、按照操作标准打开 仪器 。调零,设置检测浓度比例。 2、用移液枪先取0.1xTE 45ul,加入比色杯,再取 DNA模板5ul加入比色杯,用移液枪轻轻搅动,使其混匀。 3、按比色杯上箭头所指,放入 仪器 ,按smaple 键, 4、记录DNA模板浓度数值。 六、实验结果:
序号 | 浓度 | 260/280 | 260/230 | |
1 | ||||
2 | ||||
3 |
七、注意事项: 1、 比色杯 的放置 2、溶液的混匀 3、 比色杯 的清洗,以免样品之间的污染。