我用了快4个月这个试剂盒了，下面是一些总结出来的经验，我现在诱变每 次都很成功了，呵呵：） 1. 我溶NaOH的水PH值大概在6.5左右，所以我每次调Reagent I的时候3MNaO0H 基本都要加150uL左右。 2. 解链时用50度水浴15分钟。 3. 加入Reagent I后，50度水浴16小时。 4. 加入Reagent II和III后，室温孵育10分钟 5. 第一次离心用9000 rpm 5分钟。 6. 70%乙醇清洗3次，每次9000rpm 1 分钟，最后一次13000rpm2min。 7. 加入20mM NaOH/90%EtOH后，反映5分钟。 8. 不要去掉20mM NaOH/90%EtOH，直接加入90%乙醇后离心，9000rpm 1min 9. 90%乙醇清洗2次，每次9000 rpm 1 min，最后一次13000rpm 3min 10. PH 7.5 TE buffer 65度 溶解 15 min PS: 如果发现ＰＣＲ结果中M,U,W都有产物，则提高些退火温度，因为毕竟这几对引物都只由几次位点甚至只有一个位点的差异，故非特异结合的可能性很大。 另外，每次PCR前一定把处理的DNA离心一下，因为会有残留的小珠，即Reagent III，它会影响PCR的结果。 还有问题，欢迎发帖一起讨论：）