实验方法> DNA实验技术> DNA基础知识>方法二:细菌基因组DNA的微量提取法

方法二:细菌基因组DNA的微量提取法

关键词: 细菌 基因组来源: 互联网

 

本方法通过SDS裂解细胞,蛋白酶降解蛋白,CTAB去除多糖成分 一:仪器:同方法一 二:试剂:TE、TAE缓冲液;10%SDS;5MNaCL; 20mg/ml蛋白酶K;CTAB/NaCL溶液(10% CTAB,0.7M NaCL  4.1gNaCL 溶于80ml水中,缓慢加入10gCTAB,加热溶解);25/24/1,酚/氯仿/异戊醇; 24/1,氯仿/异戊醇;异丙醇;70%及100%乙醇 三:操作 1.5ml  对数生长期细菌细胞            离心,5000rpm,1min          沉淀            溶于500μl  TE缓冲液中混匀            30μl 10%SDS,3μL蛋白酶K,混匀,37℃,1小时            100μl NaCL(5M)  混匀            80μl的CTAB/NaCL,*混匀;65℃ 10min(可不做)            加入等体积酚/氯仿/异戊醇混合液,混匀, 离心12000rpm,4-5min         取上清,以下操作与方法一中有机溶剂抽提、沉淀、干燥、除RNA 、复溶等步骤一致。 注意 1,*此步操作后,离心管中NaCL的浓度不应低于0.5M,否则DNA将与CTAB共沉淀。   2,本法适用于从多糖含量高的样品中提取DNA。对于菌体样品,通过此流程,可以获得较为完整的DNA分子。

 

 

推荐方法

Copyright ©2007 ANTPedia, All Rights Reserved

京ICP备07018254号 京公网安备1101085018 电信与信息服务业务经营许可证:京ICP证110310号