人大肠杆菌 O157 酶联免疫（ ELISA ）

试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

药品名称：

通用名：人 大肠杆菌 O157 酶联免疫分析试剂盒

使用目的：

本试剂盒定性测定人血液、或其它相关组织中 大肠杆菌 O157

实验原理：

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫法（ ELISA ）测定标本中 人 大肠杆菌 O157 。用纯化的大肠杆菌 O157 抗体 包被微孔板，制成固相抗体，可与样品中大肠杆菌 O157 相结合 ，经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后 再与 HRP 标记的大肠杆菌 O157 抗体 结合，形成抗原 - 抗体 - 酶标抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（ OD 值），与 CUTOFF 值相比较，从而判定标本中 人 大肠杆菌 O157 的存在与否。

试剂盒组成：

标本要求：

1 ．标本处理：血清、血浆标本可直接检测

2 ．标本按要求制备后尽早进行实验。如不能及时检测，可 将标本在 -20 ℃ 保存一个月，但 应避免反复冻融。

3．不能检测含NaN3的样品 ，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（ HRP ）活性。

操作步骤：

1.         编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照 2 孔、 阳性对照 2 孔、空白对照 1 孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）

2.         加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50μl 。然后在 待测样品孔先加样品稀释液 40 μl ，然后再加待测样品 10 μl 。 加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，

3.         温育：用封板膜封板后置 37 ℃温育3 0 分钟。   

4.         配液：将 20 倍浓缩洗涤液加蒸馏水至 600ml 后备用

5.         洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。

6.         加酶：每孔加入酶标试剂 50μl ，空白孔除外。

7.         温育：操作同 3 。

8.         洗涤：操作同 5 。

9.         显色：每孔先加入显色剂 A 50μl ，再加入显色剂 B 50μl ，轻轻震荡混匀， 37 ℃避光显色15 分钟

10.     终止：每孔加终止液 50μl ，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11.     测定：以空白空调零， 450nm 波长依序测量各孔的吸光度（ OD 值）。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。

结果判定：

    试验有效性：阳性对照孔平均值 ≥1.00; 阴性对照平均值 ≤0.15

  临界值（ CUT OFF ）计算：临界值 = 阴性对照孔平均值 +0.15

  阴性判定：样品 OD 值 < 临界值（ CUT OFF ）者为人 大肠杆菌 O157 阴性

  阳性判定：样品 OD 值 ≥ 临界值（ CUT OFF ）者为人 大肠杆菌 O157 阳性

注意事项

1 ．操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。

2 ．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

3 ．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

4．  封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5 ．底物请避光保存。

6 ．试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为 630nm

7 ．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为 2M 的硫酸，使用时必须注意安全。

规格：

     96 人份 / 盒

保存条件及有效期

1 ．试剂盒保存： ； 2-8 ℃ 。

2 ．有效期： 6 个月

-------------------------------------------------------------------------------------------

Shanghai Yueyan Biological Technology Co.,Ltd

Address:Room1104,No.9Building,Ning Guo Road No313,YangPu District,Shanghai,China.

Tel:+86-021-55785280 55785281

Fax:+86-021-55785279

E-mail:biolzy@yahoo.cn

-------------------------------------------------------------------------------------------