大鼠 肌肝（Cr ） 酶联免疫分析（ ELISA ）

试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

药品名称：

通用名： 大鼠 肌肝（ Cr ） 酶联免疫 分析试剂盒

使用目的：

本试剂盒用于测定大鼠血清，血浆及相关液体样本中 肌肝（ Cr ） 含量。

实验原理

本试剂盒应用间接法测定标本中大鼠 肌肝（ Cr ） 水平。用纯化的大鼠 肌肝（ Cr ） 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入已知浓度的 肌肝（ Cr ） 标准品和未知浓度的 肌肝（ Cr ） 待检样品， 温育后，加入生物素标记的抗 IgG 抗体， 再与链霉亲和素 -HRP 结合，形成免疫复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 肌肝（ Cr ） 呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（ OD 值），通过标准曲线计算样品中大鼠 肌肝（ Cr ） 浓度。

试剂盒组成

标本要求

1 ． 不能检测含NaN3的样品 ，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（ HRP ）活性。

2． 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可 将标本放于 -20 ℃ 保存，但 应避免反复冻融

操作步骤

1.       根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。

2.       加样： 分别设空白孔（空白对照孔不加样品，其余各步操作相同）、标准品孔、 待测样品孔。然后在标准品孔中加入标准品 50μl ，在样本反应孔中先加入待测样品 10μl 再加入样品稀释液 40μl （样品最终稀释度为 5 倍），盖上封板膜，轻轻振荡混匀， 37 ℃ 温育 45 分钟。

3.       配液：将 20 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 20 倍稀释后备用

4.       洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 4 次，拍干。

5.       加生物素标记的抗 -IgG 抗体：每孔加入生物素标记的抗 -IgG 抗体 50μl 。 37 ℃ 温育 30 分钟

6.       洗涤：操作同 4 。

7.       加链霉亲和素 -HRP ：每孔加入 50μl 的链酶亲和素 -HRP ，轻轻振荡混匀， 37 ℃ 温育 30 分钟。

8.       洗涤：操作同 4 。

9.       显色：每孔先加入显色剂 A 50μl ，再加入显色剂 B 50μl ，轻轻震荡混匀， 37 ℃ 避光显色15 分钟.

10.   终止：每孔加终止液 50μl ，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11.   测定：以空白空调零， 450nm 波长依序测量各孔的吸光度（ OD 值）。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。

计算

    以标准物的浓度为横坐标， OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的 OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值待入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

注意事项

1 ．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2 ．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3 ．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4．  如标本中待测物质含量过高（样本 OD 值大于标准品孔第一孔的 OD 值），请先将样本稀释一定倍数（ n 倍）后再测定，计算时请最后乘以稀释倍数（ ×5 ×n ）。

5．  封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6 ．本试剂不同批号组分不得混用。显色剂 B 请避光保存。

7 ．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为