酵母质粒提取中酵母破壁问题的两种方法
关键词: 酵母 质粒 提取来源: 互联网
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我给你介绍两个必叫简单点的酵母破壁方法,非常实用,我作过很多实验,这两个方法是我自己总结出来的,希望对你有用!
酵母的细胞壁比较厚,不易破,而且细胞壁中含有的一些成分容易影响以后的实验,所以破壁的步骤非常关键!其他步骤只要你按照说明就可以了。
1. 酚氯仿剧烈振荡方法破壁:培养好的1ml酵母细胞在STE溶液中洗涤两次后,用70ulTE缓冲液重旋!加入50ul玻璃珠(sigma公司),加入80-100ul酚氯仿,剧烈振荡5-10分种后,使用氯仿抽取去除酚和蛋白,然后按照其他步骤沉淀就可以得到你的质粒 ,DNA的提取也可以使用这种方法。
2.反复冻融破壁:培养好的1ml酵母细胞在STE溶液中洗涤两次后,加入200ul缓冲液[2% Triton X-100, 1% SDS, 100 mM NaCl, 10 mM Tris-HCl (pH 8.0), 1 mM EDTA (pH 8.0)],使用液氮和96-98度沸水反复冻融3-5次,然后使用酚氯仿抽提蛋白!其余步骤参考其他文献
3.下面两个文献对你会有所帮助!请参考!不错的方法!
pid extraction of DNA from bacteria and yeasts
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