免疫胶体金银染色和其它免疫细胞化学方法一样，要想得到好的染色效果，关键取决于标本处理是否适当，只有使抗原性及组织结构保存的好，才能使后续的染色成功成为可能，其次要用高特异性和高效价的一抗，选择合适的稀释度。

由于免疫组化方法广泛应用于不同的生物学科，所要检出的抗原种类繁多，性质也各不相同。因此，不可能有一种适用于所有抗原的固定剂，而是根据不同的抗原性质区别对待。根据我们使用的固定剂介绍如下，仅供参考。

1、固定剂的选择及其相应的固定时间

（1）酶：冰冻切片不固定，或用95%乙醇，固定时间为10min。

（2）激素：冰冻切片、涂片、印片，不固定或丙酮、甲醇、乙醇、PEG固定。固定时间为4℃*30min。

（3）免疫球蛋白：中性福尔马林、四氯化碳（1%甲醛），固定时间为30min。

（4）白蛋白：95%乙醇含1～5%冰醋酸。固定时间为30min。

（5）纤维蛋白原：95%乙醇含1%～5%冰醋酸。固定时间为30min。

（6）病毒：丙酮、100%乙醇、甲醇、乙醚。固定时间为30min。

（7）糖蛋白：PLP、丙酮。固定时间为30min。

（8）脂质： Forssman 中性福尔马林。固定时间为20min。

（9）抗原： 2.5%硫代硫酸钠，冰冻切片不固定。固定时间为20min。

（10）免疫电镜：PLP、戊二醛、戊二醛-多聚甲醛、ECD-G等。固定时间为30min。

2、切片的处理与粘附

免疫组化染色过程较复杂，洗涤的次数较多，而且均需振荡洗涤，抗原片粘贴不牢，往往在最后的时刻，还没有等显色就会脱落导致前功尽弃，这个环节虽小却会影响大局。因此，为了保证切片染色成功，必须把切片处理好，解除脱片的后顾之忧。