一、目的要求

1.学习电泳原理和技术。

2.学习和掌握SDS-聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳分离蛋白质技术。

二、原理

聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺（acrylamide，简称Acr）和交联剂N，N-甲叉双丙烯酰胺（N，N-methylene-bisacylamide，简称Bis）在加速剂N，N，N，N-四甲基乙二胺（N，N，N，N-tetramethyl ethylenedia mine，简称TEMED）和催化剂过硫酸铵[ammonium persulfate（NH4）2S2O8，简称AP）或核黄素（ribofavin即vitamin B2，C17H20O6N4）的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶，以此凝胶为支持物的电泳称为聚丙烯酰胺凝胶电泳（polyacrylamide gel electrophoresis，简称PAGE）。

聚丙烯酰胺凝胶有下列特性：

(1)在一定浓度时，凝胶透明，有弹性，机械性能好；

(2)化学性能稳定，与被分离物不起化学反应，在很多溶剂中不溶

(3)对pH和温度变化较稳定；

(4)几乎无吸附和电渗作用，只要Acr纯度高，操作条件一致，则样品分离重复性好；

(5)样品不易扩散，且用量少，其灵敏度可达10-6g

(6)凝胶孔径可调节，根据被分离物的分子量选择合适的浓度，通过改变单体及交联剂的浓度调节凝胶的孔径；

(7)分辨率高，尤其在不连续凝胶电泳中，集浓缩、分子筛和电荷效应为一体。因而较醋酸纤维薄膜电泳、琼脂糖电泳等有更高的分辨率。

凝胶浓度（T）的选择与被分离物质分子量密切相关。

表3.4 分子量范围与凝胶浓度的关系　

聚丙烯酰胺凝胶电泳分为连续系统与不连续系统两大类。

目前常用的多为圆盘电泳（如图1）和板状电泳（如图2），两者电泳原理完全相同。

图1 聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳示意图（A为正面，B为剖面）

(1)样品胶pH6.7 (2)浓缩胶pH6.7 (3)分离胶pH8.9 (4)电极缓冲液pH8.3

图2 夹心垂直板电泳槽示意图 　　　　　　　　图3 凝胶模示意图

1.样品槽模板 2.长玻璃板 　　　1.导线接头 2.下贮槽 3.凹形橡胶框 4.样品槽模板 5.固定螺丝 6.上贮槽 7.冷凝系统