设备与材料

1. GDS-80 基因枪配口径 4.5 mm的枪管，压力调节器和软管（WGB09O001）（Wealtec）

2. 无菌操作台

3. 3 cm目标间隔件（Wealtec）

4. 纯度 99.999％氦气

5. 样本：玉米胚芽（Zea mays L. embryo.）

实验步骤

1. 调整 GDS-80基因枪输出压力设置，并在实验前按说明书中指示调节设定，确保轰击喷射均匀。注意，调节均匀喷射条件之后，需使用 70％乙醇清洗加样套管及枪管。

2. 操作前需对无菌操作台进行清洁和消毒处理工作。（至少紫外线曝光半小时）

3. 在放入无菌操作台之前先对枪管、加样套管、目标间隔件和镊子进行消毒处理。

4. 需先喷洒浓度为70%的乙醇在GDS-80基因枪主体以及软管组件表面，再将它们放入无菌操作台。

5. 组装管筒和样品加载套管，使GDS-80基因枪主体置于无菌操作台内部并连接整个GDS-80系统。

6. 将压力调节器设为50psi，并确保气体流速约10〜15 L/min。

7. 在进行轰击前，准备DNA质粒/金粉溶液。（0.5 ug DNA/ 0.148 mg金粉）

8. 在一个3或6 cm的目标间隔件辅助下对样品进行轰击，并在轰击之后将样品转移到 MS 培养基上。

9. 培育样品至少两天的时间，然后以GUS染色溶液进行染色，为期一天。

10. 在显微镜下观察结果。

讨论

在无菌操作台内操作时，有很多方面需要时刻注意，否则可能导致严重污染并且影响实验的观察结果（如图1)。如果培养皿内部被污染，即使在DNA样本没有被污染的情况下，GUS蛋白质含量也将会因为过少而导致无法被发现。 污染通常是由以下几种情况造成的，适当的注意即能够避免：

a.由轰击设备产生的污染。

在无菌操作台操作GDS-80基因枪时，用户很容易忘记拆开枪管和样本加载套管进行消毒，而只将70％浓度的酒精喷洒在样本加载套管的外表面。

这样的消毒并不彻底，因为即使轰击原料DNA质粒样本是在100%纯酒精中准备的，仍然很难清除那些依附在枪管以及样品加载套管上的微生物，这样就使得传递过程中，细菌会被一同推送并扩散到样品上。

GDS-80基因枪在植物针对性实验中可以使用一些配件协助实验更好地进行，例如，使用目标间隔件来辅助培养皿中进行的组织实验，或使用UTS-10进行愈伤组织细胞实验。

所有实验中使用的配件，甚至包括作为支撑样品的配件，都能轻易接触到样品，因此应充分将这些部件消毒以防止污染。所有实验用设备部件均可以采用高压灭菌器在121摄氏度杀菌30分钟，以确保彻底消毒。另一种消毒方法是将枪管与样本加载套管置入70％乙醇溶液中浸泡20分钟以上，并将其干透后放入无菌操作台中。

b.来自样本本身的污染。

从田地中取来的植物样本本身与很多微生物有接触，如果样本实验前未经消毒将很容易在介质中被污染，因此样本务必在实验前进行消毒。

由于样本的特性不同，所进行的消毒方式也不同。最常用的方法是将样本浸泡在准备好的溶液中并添加适当比例的漂白剂和Tween-20，一起浸制20分钟以上，然后使用无菌蒸馏水清洗，并在实验前把样本分散放置在干净的培养皿中晾干。

c. 不熟练的操作会导致无菌操作台内的污染。

在无菌操作台内部进行实验时，绝大部分的人会忽略一些重要环节。在无菌操作台内进行实验之前，请确保彻底清洗双手并且使用浓度为70%的乙醇进行消毒。一旦进入无菌操作台进行双手操作，请勿在结束实验前将手撤离操作台。

如果有将物体移进或者移出无菌操作台的需要，请务必在返回无菌操作台内部进行操作之前使用浓度为70%的乙醇消毒双手。在操作培养皿的时候，请不要将盖板敞开太多，也不要在盖板敞开的情况下，让手或者任何物体在其上方经过。确保在送其进入无菌操作台之前将移液枪头消毒。

每次夹取样品之前都要更换移液枪头。只可以用镊子处理目标样本，同时也要确保每次操作前用火来消毒镊子，不能让镊子碰到样本以外的任何物品。如果样本掉在桌子上，切勿将其捡起放回培养基中。确保在将所有的设备和材料放入无菌操作台之前，都已经使用正确的方法消过毒。

d. 无菌操作台并没有得到很好的维护。

根据无菌操作台的设计，操作台内过滤器在使用一段时间后，或者当滤液对微生物的作用减弱时应进行更换。请定期更换无菌操作台内的过滤器以保持最佳的无菌环境。即使无菌操作台得到良好的维护，操作者仍需要在使用前喷洒70％浓度的乙醇溶液来清洁机器内部的操作区域。 在进行整体系统操作前，所有的实验器材都必须进行严格消毒处理。在操作中不允许有任何污染。虽然每个实验室的无菌实验台的标准操作程序（SOP）不同，但其主要目都是相同的，均以防止污染为准。操作者应认真地遵循SOP来操作，并注意我们上面说过的如何避免微生物的污染的几个重要方面。