高效液相色谱仪流动相为溶剂，既有运载作用，又和固定相一样，参与对组分的竞争，因此溶剂的选择对分离十分重要。一、溶剂对于待测样品必须具有合适的极性和良好的选择性。二、溶剂要与检测器匹配：1、对于紫外吸收检测器，应选用检测器波长比溶剂的紫外截止波长长。溶剂的紫外截止波长指当小于截止波长的辐射通过溶剂时，溶剂对此辐射产生强烈吸收，此时溶剂被看作是光学不透明的，会严重干扰组分的吸收检测。2、对于示差折光检测器，要求选择与组分折光率有较大差别的溶剂作流动相，以达最高灵敏度。三、高纯度：由于高效液相色谱灵敏度高，对流动相溶剂的纯度要求也高，不纯的溶剂会引起基线不稳或产生伪峰，痕量杂质将使截止波长值增加 50～100nm。四、化学稳定性好：不能选用与样品发生反应和聚合的溶剂。五、低粘度：常用的低粘度溶剂有丙酮、乙醇和乙腈等。若溶剂粘度高，会增高压力，不利于分离。但溶剂粘度过低（如戊烷等），易在色谱柱和检测器内形成气泡，影响分离。