芯片常见问题分析
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1 芯片实验和定量PCR 的优劣比较? 基因表达 谱芯片实验可以对大量基因一次性进行定量研究,定量PCR则对大量基因需逐一进行定量研究。 2 在芯片制作过程中的PCR原液是否可以为客户保存? 可以抽干冷冻保存一年。 3 可否用DNA和芯片杂交? 不可以,因为芯片上的样品是cDNA而真核基因DNA中普遍存在內显子,核酸杂交无法顺利进行。 4 对于临床症状不明显的的遗传病,如何取样? 可以从病人抽取血样或者骨髓。 5 如何保存血样? 将血样中血细胞分离出来,然后-80℃低温保存。 6 脱落细胞是否都是死亡的细胞, 其中是否可以抽提mRNA? 不完全是死亡的细胞, 但是mRNA的含量比较少, 建议最好用正常细胞抽提mRNA。 7 完成一张芯片的实验,需要的细胞的量是多少? 需要5×106的细胞量 8 提供的电泳图和OD值如何评价mRNA的质量? 电泳图可以分析mRNA和总RNA是否降解, OD值可以判断纯度。 9 是否可以将同一症状的病例混合后抽提,看共性表达? 可以。 10 芯片是否可以重复使用? 不可以。 11 杂交后的芯片如何保存? 避光常温保存几个星期。 12 在实验前期,如何定参照物? 根据实验设计来确定使用共同参照物还是各自的参照物。 13 如何消除基因芯片 实验中的个体差异? 可以使用同一样品重复芯片实验,取其共性,获得可靠的数据结果。 14 芯片在杂交过程中为什么会发生非特异性杂交, 如何降低? 这是由于DNA碱基错配造成, 提高芯片杂交后洗脱液的温度可以降低非特异性杂交。 15 芯片上基因cDNA是从什么组织中取得的? 芯片上基因cDNA来源于美国I.M.A.G.E.项目,是从人的各种组织中分离确定的,并且每个基因 cDNA具有明确功能定义的,与其它基因不相重复的。