相关专题   （一）材料及试剂 1．猪瘟单抗纯化抗原 2．兔抗猪IgG酶标抗体 3．猪瘟阳性血清 4．猪瘟阴性血清 1～4均由指定的生物制品所购买。 5．ELISA反应板 6．包被液 碳酸钠 1.50g 碳酸氢钠 2.93g H2O加至 1 000ml pH值9.6 7．PBS 液 氯化钠 8.90g 磷酸二氢钾 0.20g 无水磷酸氢二钠 2.13g 加双馏水 1 000ml 8．PBS－吐温洗涤液 PBS液 1 000ml 犊牛血清 5ml 混合即可 9．底物溶液 ⑴ 0.1Mol/L柠檬酸液 柠檬酸 21g 双蒸馏水加至 1 000ml ⑵ 0.2Mol/L Na2HPO4液 Na2HPO4·12H2O 71.6g 双蒸馏水 加至 1 000ml ⑶ pH5.0磷酸盐－柠檬酸缓冲液 取⑴液 24.30ml ⑵液 25.70ml 混匀即可 ⑷邻苯二胺液 取⑶液 50ml 双馏水 50ml 磷苯二胺 20mg 30%H2O2 0.15ml 待邻苯二胺溶化后再加H2O2，现用现配。 10．终止液 浓H2SO4(98%) 22.2ml H2O 177.80ml （二）操作方法 1．用包被液将猪瘟弱毒单抗纯化酶联抗原、猪瘟强毒单抗纯化酶联抗原各做100倍稀释，每孔包被100µl，4℃湿盒过夜。 2．次日取出，甩去孔内液体，3×3′冲洗。 3．将待检血清以PBS液做400倍稀释，每孔加100µl同时将猪瘟阳性血清、猪瘟阴性血清各做100倍稀释，于对照孔中加100μl。37℃温育1.5h～2h。 4．重复第二步，取出，甩去孔内液体，3×3′洗涤。 5．将兔抗猪IgG酶标抗体以PBS液做100倍稀释，每孔加100μl，37℃温育1.5h～2h。 6．重复第4步。 7．每孔加底物溶液100µl，室温下观察显色反应。当阴性对照孔稍显色时，立即终止反应，并以阴性孔做空白对照。 8．每孔加终止液50µl立即于酶联免疫 吸附检测仪测定490nm波长的光密度。 （三）结果判定 在猪瘟弱毒酶联板上，OD≥0.2，为猪瘟弱毒抗体阳性；OD＜0.2，为猪瘟弱毒抗体阴性。 在猪瘟强毒酶联板上，OD≥0.5，为猪瘟强毒抗体阳性；OD＜0.2，为猪瘟强毒抗体阴性。