直接IM―PCR (以rhIL-3的检测为例) 【试剂与配制】TBS：20mmol/L Tris-HCl（pH7.4），150mmoI/L NaCL封闭液：1.5％ BSA （用TBS配制）抗hIL-3单抗生物素化羊抗鼠IgG亲合素DNA指示分子(生物素―AdAT)PCR反应液：5×PCR缓冲液10μl，dNTP 4μl，引物4μl，EP-DNA聚合酶0.5μl,蒸馏水31.5μl 【操作方法】 (1) 用TBS稀释rhIL-3至6.0μg/ml～6.0×10-8μg/ml；(2) 取50μl rhIL-3稀释液加至0.5ml塑料离心管中，4℃过夜,弃上清液；(3) 每管中加封闭液30μl，37℃静置2h，弃去液体，用TBS洗一次；(4) 加50μl抗hIL-3单抗(1:40),温育30～60min后用TBS洗涤；(5) 加入50μl生物素化羊抗鼠IgG(1:500),温育后洗涤如上；(6) 加入50μl亲合素(10ng/ml),温育后洗涤如上；(7) 加50μl DNA指示分子10ng/ml,温育后洗涤如上；(8) 加50μl PCR反应液,25μl石腊油,离心5s；(9) PCR扩增:94℃×60s,55℃×60s,71℃×120s,30个循环后71℃延伸5min；(10) 取5μl PCR扩增产物加于2％琼脂糖凝胶上电泳；EB染色，紫外灯下拍摄结果，激光扫描定量。