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细胞内质网内钙离子浓度荧光检测试剂盒使用说明

2020.4.20

细胞内质网内钙离子浓度荧光检测试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

细胞内质网内钙离子浓度荧光检测试剂是一种旨在通过内质网钙离子特异性荧光探针Mag-Fluo-AM，与钙离子结合后，其荧光强度显著增强，在荧光酶标仪下观察相对荧光峰值的变化，来测定内质网中总钙离子浓度的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种活体细胞（动物、人体等）内内质网钙离子的浓度检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，检测敏感。

技术背景

钙是人体中的一种重要电介质和矿物质，占1150克。其中99％的钙以氟磷灰石钙（calcium fluorophosphate apatite）形式存在于骨组织中。非骨组织钙成分主要存在于细胞内。钙具有两种主要形式：一种是非弥散型蛋白结合钙，其构成约40％至50％的血清中的总钙含量；另一种为弥散型游离钙，其进一步分成具有活性的复合钙（complexed calcium）和离子钙（ionized calcium）。钙对神经肌肉兴奋性（neuromuscular excitability）、血液凝固、酶的激活、离子跨膜运输、释放神经传导介质、信使传导等方面起着重要作用。在细胞内，钙离子主要储存在线粒体和内质网等细胞器中。其中内质网钙离子储存在控制细胞活化、调控信号通路、蛋白分子转录后修饰，维持细胞内环境钙离子平衡方面起着重要作用。内质网钙的检测包括沉淀法、EDTA鳌合滴定法、火焰光度法（flame photometry）、原子吸收分光光度法等技术，但容易受到钠、钾、磷酸盐、硫酸盐的干扰，或者受限于仪器的特殊的要求，以及需要内质网纯化。Mag-Fluo-AM染料是一种钙离子低亲和性的荧光标记染料，特异性地由内质网捕获，可以检测内质网内的游离钙离子浓度的变化。在荧光酶标仪下，激发波长490nm，散发波长525nm，来定量测定内质网的钙浓度。

产品内容

清理液（Reagent A） 40毫升

染色液（Reagent B） 30微升

介导液（Reagent C） 600微升

通透液（Reagent D） 120微升

饱和液（Reagent E） 2毫升

阴性液（Reagent F） 2毫升

产品说明书 1份

保存方式

保存清理液（Reagent A）、染色液（Reagent B）、介导液（Reagent C）和通透液（Reagent D）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里，有效保证6月

用户自备

1.5毫升离心管：用于工作液配制的容器

细胞培养箱：用于染色孵育

黑色96孔板：用于样品操作的容器

荧光酶标仪：用于荧光分析

（共聚焦）荧光显微镜：用于荧光染色观察

实验步骤

测定准备

设定好荧光酶标仪（22℃）：激发波长490nm，散发波长525nm
测定开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的染色液（Reagent B）室温下融化，然后分别移出30微升介导液（Reagent C）和1.5微升染色液（Reagent B）到新的1.5毫升离心管，标记为染色工作液，并放在暗室里备用。然后进行下列操作。

二、荧光酶标仪检测