当外泌体遇上环状RNA（五）
（6）circSHKBP1直接HSP90相互作用并抑 制其降解
在HGC27细胞中用circSHKBP1探针的RNA pull-down和蛋白质谱结果显示两个差异表达蛋白HSP90β和HSP90α（HSP90的异构体）在过表达circSHKBP1的GC细胞中富集。RIP实验显示，circSHKBP1能直接作用于HSP90。使用qPCR和ELISA分别检测HSP90的mRNA和蛋白水平，结果显示GC肿
瘤组织中的HSP90
mRNA和蛋白均上调且HSP90蛋白表达与circSHKBP1表达呈正相关。然而，在过表达circSHKBP1中使用CHX抑
制蛋白，HSP90的降解受到明显抑 制。由于泛素连接酶STUB1可以泛素化HSP90。使用蛋白酶体抑
制剂MG132处理时HSP90的降解速度减慢。结合上述研究，作者认为circSHKBP1和STUB1竞争性结合HSP90，通过IP分析获得证实。此外，HSP90的抑
制剂NMS-E973在体外削弱了circSHKBP1的促ai作用。这些结果表明，circSHKBP1可以直接与HSP90结合，并抑
制STUB1对HSP90的泛素化，从而促进GC的发展。
（7）circSHKBP1调节体内GC的生成
作者构建了circSHKBP1沉默株系（LV3-sh1、LV3-sh2）和超表达株系（LV5-circSHKBP1），将相应细胞接种到小鼠体内，发现源自LV3-sh1细胞的肿
瘤明显小于源自LV3-NC的，表明敲低circSHKBP1会抑 制肿
瘤生长。另外，将转导LV5-circSHKBP1和LV5-NC的细胞接种到裸鼠体内，并对每组中一半数量的小鼠每周给予两次VEGF抗体。发现源自LV5-circSHKBP1细胞的肿
瘤比源自LV5-NC细胞的肿 瘤更大且更重。此外，qPCR 鉴定血清外泌体和肿 瘤的circSHKBP1的表达，发现外泌体circSHKBP1依赖于ai组织circSHKBP1的表达，这证实了circSHKBP1可通过外泌体递送到其他部位，并可在循环系统中检测，这使其可能成为一种很有潜力的GC分子标志物。
（8）circSHKBP1调控体内GC的转移
为了探索circSHKBP1对体内胃ai转移的影响，作者将荧光素转染到上述5个细胞系，然后注入裸鼠体内。LV5-circSHKBP1和LV5-NC组中的一半的小鼠每周接受两次VEGF抗体处理。结果表明，敲低circSHKBP1可显
著减少肺转移灶的数目和大小且ISH显示，敲低circSHKBP1会导致GC肺转移灶中的HUR和VEGF染色明显减少。而过表达circSHKBP1可以加重肺转移病变和增加HUR和VEGF染色。而VEGF抗体可以抑
制circSHKBP1诱导的ai细胞转移。
