三色书虱体内Wolbachia形态的超微结构观察
实验概要
本研究运用透射电镜对三色书虱进行了超微结构观察，旨在进一步证实Wolbachia的存在，同时也进一步丰富Wolbachia的研究。
主要试剂
饿酸[Polysciences Inc.]
戊二醛25%水溶液[国药集团化学试剂有限公司]
环氧树脂[Tousimis research corporation]
十二烷基琥珀酸酐dodecenyl succinic anhydride[Tousimis research corporation]
六甲酸酐NMA，nadic methyl anhydrite[Tousimis research corporation]
2,4,6一三甲氨基甲基苯酚[Tousimis research corporation]
DMP-30 2,4,6-tridimethylamino methyl phenol
醋酸双氧铀[重庆川东化工(集团)有限公司化学试剂厂]
柠檬酸三钠[重庆南方试剂厂]
硝酸铅[重庆北暗化学试剂厂]
主要设备
H-7500透射电子显微镜[HITACHI]
A-1170超薄切片机[LEICA]
EM KMR2制刀机[LEICA]
EM TRIM修块机[LEICA]
实验材料
三色书虱采自野外，在实验室内建立种群。
实验步骤
1. 取材
在解剖镜下，用解剖针去掉三色书虱的头部，保留胸部和腹部，尽快放进装有约1mL2.5%戊二醛固定液的1.5mL离心管中，并使其完全浸入，放入4℃冰箱保存。
2. 包埋块制备
按以下步骤进行：
(1) 在4℃冰箱里，把样品在预冷的2.5%戊二醛中浸泡，进行预固定2h以上或过夜；
(2) 用一次性注射器吸出离心管中的戊二醛，再加入约lmL的pH值为7.8的0.lmol/L磷酸缓冲液并适当震荡清洗样品，重复3次，每次10-15 min；
(3) 用一次性注射器吸出离心管中的磷酸缓冲液，再加入约600µL 1%的饿酸，并置于4℃冰箱里固定2 h；
(4) 用双蒸水清洗3次，每次5-10 min；
(5) 加入50%乙醇约lmL，进行脱水15 min；
(6) 预先在70%乙醇加入饱和醋酸双氧铀，然后取约lmL试剂加入样品离心管中，在4℃条件下过夜；
(7) 依次用90%乙醇、90%乙醇和丙酮等体积混合液、90%丙酮、100%丙酮清洗样品，每次l0min，其中100%丙酮清洗3次；
(8) 丙酮与包埋剂等体积混合液浸透3h，再用纯包埋剂浸透2h；
(9) 把样品放入模具里用包埋剂填满，放入35℃烘箱里过夜，45℃烘箱12h， 60℃烘箱48h，进行聚合，然后取出包埋块。
3. 超薄切片
修整包埋块，把包埋块顶部修成面积略大于lmm2的等腰梯形，用超薄切片机切片，厚度在70nm左右；用200目载膜铜网捞起切片，然后用柠檬酸铅染色；最后在透射电镜下进行观察。
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项目成果
