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兔食管上皮细胞培养步骤

2021.5.29

原代细胞实验材料:
      1. 大兔的正常食管组织
      2. 6孔培养板:用多聚赖氨酸4℃包被过夜
      3. 不含Ca2+ 和Mg2+ 的1×PBS,添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素和200000U/L庆大霉素,pH7.4
      4. 手术刀、解剖剪、解剖镊、眼科剪,眼科镊
 
      实验方法:
      1. 处死大兔,取正常食管组织放入含双抗的PBS(pH=7.2)中反复清洗3次,以洗去组织表面的血丝及粘液;
      2. 小心的用眼科剪镊将食管黏膜与黏膜下组织分离;
      3. 分离出的粘膜组织用含双抗的PBS(pH=7.2)反复冲洗若干次;
      4. 将清洗后食管黏膜组织剪成1mm3 左右大小的组织块;
      5. 再次用含双抗的PBS(pH=7.2)反复清洗,直至清洗液清亮为止;
      6. 将黏膜组织块按1块/cm2 的密度接种于6孔培养板中,上皮面朝下;
      7. 将贴满组织块的培养板室温放置5~10分钟,待组织块贴壁后,转入37℃、5%CO2 的培养箱中静置培养。
      8. 静置2h左右,待组织块基本不会浮起后,加入0.5-1ml培养液,置于37℃、5%CO2 的培养箱中继续培养。3-4天后有上皮原代细胞从组织边缘爬出,7天左右铺满板面。
人高敏三碘甲状腺原氨酸(u-T3)ELISA试剂盒    进口/分装    Human Ultrasensitivity Tri-iodothyronine,u-T3 ELISA Kit                    
人黄体生成素释放激素(LHRH)ELISA试剂盒    进口/分装    Human Luteinizing Hormone-Releasing Hormone,LHRH ELISA Kit                     
人8异前列腺素(8-iso-PG)ELISA试剂盒    进口/分装    Human 8-iso prostaglandin,8-iso-PG ELISA Kit                    
人肾素(Renin)ELISA试剂盒     进口/分装    Human Renin ELISA Kit                    
人肾上腺素(EPI)ELISA试剂盒    进口/分装    Human Epinephrine/Adrenaline,EPI ELISA Kit                    
人雌二醇受体(ER)ELISA试剂盒    进口/分装    Human Estradiol receptor,ER ELISA Kit 
        

 




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