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直接免疫荧光和间接免疫荧光染色方法的异同

2021.6.29

1、接免疫荧光和间接免疫荧光染色方法的不同:

直接免疫荧光的实验方案通常较短,因为它只需要一个标记步骤。间接免疫荧光使用偶联二抗检测一抗会增加额外的操作步骤。



直接免疫荧光方法的实验方案步骤较少,更简单。间接免疫荧光方法中必须选择适当的二抗,增加了复杂度。这种情况在需要使用多个二抗的多色实验中尤为突出,每个二抗需要靶向不同的物种并偶联至不同染料。


直接免疫荧光方法中获得的信号与间接方法相比可能较弱,因为直接方法中没有使用二抗进行信号放大。免疫荧光多个二抗结合一抗可使信号放大。

2、直接免疫荧光和间接免疫荧光染色方法的相同之处:

免疫荧光 (IF) 或细胞成像技术使用抗体将荧光染料(也称为荧光素或荧光物)标记到特异性目标抗原上,所用荧光染料有诸如异硫氰酸荧光素 (FITC) 等。而通过化学方法偶联荧光素的抗体被广泛使用于IF实验中。

根据荧光素与一抗还是二抗偶联,我们将 IF 方法分为两类:直接 IF-使用单个抗体,该抗体直接指向目的靶标,一抗与荧光素直接偶联;间接 IF-使用两个抗体,一抗未偶联,荧光素偶联的二抗指向一抗,并用于检测。


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