PCR实验室如何预防污染
1、合理的实验室分区
2、实验操作流程:
(1)样品制备区进行样品处理,核酸提取;
(2)配液区配置反应体系:酶混合液和PCR反应液混合,分装至PCR反应管;
(3)样品制备区加样:样品核酸和阴阳性对照加至反应液中;
(4)PCR扩增区上机扩增检测。务必保持单向操作流程,避免各区实验室污染。
3、各个实验区内试验用品专区专用
配液区是最洁净的试验区域,样品制备区的洁净度稍差, PCR扩增区内是最易被污染的区域,各区之间试验物品专区专用,避免因交叉使用造成实验室污染。
4、试验操作要规范
(1)正确使用移液枪,保证试剂配比和计量正确,同时避免液体吸入移液枪口造成污染。
(2)实验的过程中应勤换手套,在进出不同区域或进行模板操作后,都应及时更换手套。
(3)试剂盒各组分在打开之前应先做瞬时离心(约10s),将管壁及管盖上的液体甩至管底部,从而减少污染手套或加样器的机会。开管动作要轻,以防管内液体溅出或形成气溶胶,造成污染。
(4)样本量较多时,应将反应液预混,再分装至PCR反应管,最后添加核酸模板,以减少单个添加操作繁琐造成的污染。
(5)每次试验必须设定阴性对照和阳性对照,读取结果时,在保证阴阳性对照均成立的情况下,判读样本结果才有效。
(6)实验结束后,PCR反应管严禁打开,及时放置次氯酸钠消毒液中浸泡。
5、做好日常消毒工作
每日工作完成后,及时处理实验室内废弃物,消毒液擦拭操作台面和仪器,拖布蘸取消毒液擦拭地面,开窗同风10分钟以上。