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细胞浸润生长性检测实验

2020.8.17

实验方法原理 浸润性生长是细胞浸入或穿透其它组织增殖生长能力,浸润生长性检测是检测癌性细胞的一项有意义的指标。检测方法需用其它正常组织和癌细胞共同培养,观察癌细胞向正常组织浸润生长的情况。

实验材料 鸡胚

试剂、试剂盒 Bacto

仪器、耗材 玻璃圈CO2温箱福尔马林

实验步骤

常用鸡胚皮肤或心肌组织块,作为被浸润生长的对象;今以鸡胚皮肤为例,培养过程如下


1.  程序


(1)鸡胚浸出液制备

 

(2)琼脂层制备

 

1 %Bacto琼脂(用不含NaHCO3的Eagle缓冲液配)10 分

 

小牛血清 4 分

 

鸡胚浸出液 4 分


(3)鸡胚皮培养


无菌从10 天胚龄鸡胚背部取皮,切成6~8 mm3小块;每皿中置2~3 块,贴在琼脂层表面;


(4)取内径6 mm,厚2 mm的无菌小磁杯或玻璃圈(硅橡胶圈亦可),套在鸡皮小块上;


(5)共培养


向每个小磁圈中加入25~30 μl细胞悬液(含104 个细胞的2 倍培养液),盖上平皿盖,置37 ℃CO2温箱中培养;


(6)补液


次日再向每个环中补加2 倍培养液2.5 μl;


(7)切片观察


第4 天挖取出鸡皮块,10 %福尔马林固定,常规包埋、切片、染色、光学显微镜下观察细胞对鸡胚皮肤浸润的情况。


2.  结果


如癌性细胞已浸入鸡胚皮肤内,说明该细胞具有浸润生长能力。


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