见所未见:OptiMS拓展您的质谱潜能
接下来,Lindner教授考察了对修饰后的肽的鉴定。 其中LC-MS条件为:进样770 nL,样品总量为300 pmol。CE-MS的实验条件为:进样7.7nL,样品总量为300 fmol, BGE为0.1%甲酸pH2.7,涂层为M7C4l,分离电压为25kV,E=267V/cm,ESI电压为1.7kV。同样可看到CE- MS(300fmol)的鉴定数目几乎相当于LC-MS(30pmol)的,即灵敏度比LC-MS高接近100倍;在修饰鉴定的种类上,CE-MS会少一 些。
两种技术对比:鉴定翻译后修饰的多肽
Lindner教授认为,CE-MS的分离时间很短,囿于质谱的采集速度,要想获得更多的鉴定结果,需要拓宽分离的窗口,即降低EOF。这时可采用:使用 较少正电荷的涂层,减低分离电压,提高离子强度等方法。Lindner教授比较了几种结果,CE-MS(M7C4l涂层,12.5kV分离电压)获得了非常好的结果。
两种技术对比:鉴定翻译后修饰的多肽
用CESI-MS和LC-MS,共计发现了56个翻译后修饰的多肽,实验条件为:
CESI-MS,进样7.7 nL,样品量300 fmol,毛细管涂层为M7C4l,分离电压为12.5 kV,3次总运行时间为1.9小时(115 min)
LC-ESI-MS,进样770 nL,样品量30 pmol,3次总运行时间为4.1小时(246 min)
总结:翻译后修饰的鉴定
最后,对比贝克曼新型CE-MS和传统nanoLC-MS技术,Lindner教授给予了总结,
(1)在同样的样品量下,CE-MS有更高的灵敏度、更高的序列覆盖率;
(2)使用CE-MS,可提高低分子量肽(800-1200 Da)的检出;
(3)CE-MS技术一般可缩短分析时间,该时间可通过使用不同的毛细管涂层、分离电压和缓冲液来调节;
(4)CE-MS非常适用于分析翻译后修饰的多肽;
(5)CE-MS具有非常明显的一个优势是——极低的交叉污染;
(6)这是一个耐用性(robustness)很好的技术。
(7)CESI-MS和LC-ESI-MS技术是互补的。