全自动微生物鉴定系统在临床微生物检验中的应用
作者：庄华君杨旭金映川 作者单位：130021吉林省前卫医院
传统的微生物分离、鉴定方法操作繁杂，周期长，准确性差，灵敏度低，对实验室技术人员的专业技术、操作技能、工作经验要求极高，快速和准确获得细菌的鉴定及药敏结果是非常必要的。近年来随着计算机的发展及广泛应用，微生物鉴定的自动化技术近十几年得到了快速发展。先后出现了许多全自动细菌鉴定与药敏系统，比如VITEK 系统、MicroScan WaikAway系统、MicroScan AS-4 微生物分析仪、PHOENIXTM 系统等。这些技术的应用，为医学微生物检验工作提供了一个简便、科学的细菌鉴定程序，大大提高了细菌鉴定的准确性,在很大程度上提高了工作效率，但同时也应注意一些问题，本文对几种常用的鉴定系统在临床微生物检验中的应用情况做一综述。
1、全自动微生物鉴定系统的基本原理
全自动微生物鉴定系统是基于生物信息编码（数码）鉴定细菌的新方法。数码鉴定是指通过数学的编码技术将细菌的生化反应模式转换成数学模式，给每种细菌的反应模式赋予一组数码，建立数据库或编成检索本。通过对未知菌进行有关生化试验并将生化反应结果转换成数字（编码），查阅检索本或数据库，得到细菌名称。其基本原理是计算并比较数据库内每个细菌条目对系统中每个生化反应出现的频率总和。
鉴定系统的工作原理因不同的仪器和系统而异。不同的细菌对底物的反应不同是生化反应鉴定细菌的基础，而试验结果的准确度取决于鉴定系统配套培养基的制备方法、培养物浓度、孵育条件和结果判定等。大多鉴定系统采用细菌分解底物后反应液中pH的变化，色原性或荧光原性底物的酶解，测定挥发或不挥发酸，或识别是否生长等方法来分析鉴定细菌。
药敏试验分析系统的基本原理是将抗生素微量稀释在条孔或条板中，加入菌悬液孵育后放入仪器或在仪器中直接孵育，通过测定细菌生长的浊度，或测定培养基中荧光指示剂的强度或荧光原性物质的水解，观察细菌的生长情况。在含有抗生素的培养基中，浊度的增加提示细菌生长，根据判断标准解释敏感或耐药。
2、VITEK 系统
VITEK系统是由生物-梅里埃公司生产的全自动微生物鉴定和药敏分析系统。第一代产品有以下四个规格VITEK AMS 32、60、120、240、VITEK 2 。由计算机主机、孵育箱/读取器、充填机/封口机、打印机等组成。鉴定原理是根据不同微生物的理化性质不同，采用光电比色法，测定微生物分解底物导致pH改变而产生的不同颜色，来判断反应的结果。在每张卡上有30项生化反应。由计算机控制的读数器，每隔1h对各反应孔底物进行光扫描，并读数一次，动态观察反应变化。一旦鉴定卡内的终点指示孔到临界值，则指示此卡已完成。系统最后一次读数后，将所得的生物数码与菌种数据库标准菌的生物模型相比较，得到相似系统鉴定值，并自动打印出实验报告。可以鉴定革兰氏阴性杆菌、革兰氏阳性球菌、酵母菌、需氧芽孢杆菌、厌氧菌、奈瑟氏菌、嗜血杆菌、非发酵菌等，并可进行药敏检测，对提高工作效率起到了很大作用。
因仪器细菌鉴定是用数值分类法，它遵循的是各个生化反应“等重要原则”进行分类。而传统分类法的原则是将细菌的基本性质分为主要和次要。如果仪器鉴定结果标准化百分概率很高，而主要的生化反应不符合，它结果的准确性就值得怀疑，必须用手工试验做主要试验加以证实，否则会得出错误的结论［1］。利用VITEK专用药敏卡，可以在菌株鉴定的同时检测药物敏感性。目前已有国内文献报道检测超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的方法比较［2, 3］。周铁丽等用纸片扩散确证法和VITEK-AMS 专用药敏卡GNS-506 对临床分离的204株大肠埃希菌和70株肺炎克雷伯菌进行ESBLs检测，其敏感性为77.6%,存在比较严重的假阴性,与国外报道VITEK-AMS 检测ESBLs 敏感性为99.5% ［4］不符。认为现有的VITEK-AMS专用检测卡虽然操作简便,特异性好,但灵敏度较低,适用于国内医院检测ESBLs［5］。
