神经系统束路追踪实验
实验方法原理 神经束路追踪技术是研究神经元之间纤维联系的最常用的方法，包括利用神经纤维损伤后发生溃变和神经元轴浆运输原理来进行追踪，而后者在各个方面存在明显的优势。常用的追踪剂有辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)、PHA-L、生物素葡聚胺(biotinylated-dextranamine, BOA)、霍乱毒素B(choleratoxin, CT)以及荧光素追踪剂（如FG、Oil等）。各追踪剂的具体原理可参考李云庆主编的《神经解剖学》。
实验材料 实验动物
试剂、试剂盒 10%BOA
仪器、耗材 5µL微量进样器(Hamilton公司）小鼠脑立体定位仪电钻
实验步骤
1.小鼠腹腔注射1%戊巴比妥钠麻醉后，用立体定位仪固定头部。
2.头顶部皮肤常规消毒，正中矢状切开头皮，依照小鼠图谱坐标定位，颅骨钻孔，在纹状体部位用微盘进样器徐缓注人0.5µL10%BDA溶液（溶于生理盐水），5min内注射完毕，留针lOmin后缓慢退出。
3.动物存活7d后进行灌注固定，取出脑组织。
4.25%蔗糖脱水后，进行连续冠状冰冻切片，片厚14µm,切片贴于包被明胶的载玻片上。
5将含黑质部位的切片分别入0.1MPBS中漂洗后，入含有辣根过氧化物酶－链霉卵白素复合物(0.1M PBS 1:500稀释）中，孵育2h后进行DAB显色。
6.脱水、透明，DPX封片。第5步也可以进行加入抗生物素的荧光二抗进行孵育，然后封片，用荧光显微镜观察。BDA可用于顺行和逆行追踪，但顺行追踪的效果更好一些，可以很清楚地观察到在中脑黑质部位棕色的DAB显色阳性纤维和绿色荧光阳性纤维，可见，由BDA追踪的神经纤维末梢形态比较清楚，可以观察到由纹状体向黑质的投射情况。
注意事项
1.追踪剂有顺行和逆行之分，根据实验目的选择恰当的追踪剂。
2.注射完追踪剂后，动物存活的天数要根据追踪神经通路的长短决定。
其他
1.在立体定位注射过程中，微量进样器要缓慢注入追踪剂，注射完后要留针。
2.注射部位的准确度和注射剂量的多少直接决定注射追踪剂的效果，新手需要多加练习，方能达到理想效果。
