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快速柱色谱法

2021.7.04

快速柱色谱法是1978年发展起来的一种替代长柱色谱法的方法。

该方法旨在从混合物中分离组分,从而纯化它。它是从现有的长柱色谱技术建立起来的,耗时且常常不令人满意。简而言之,快速柱色谱法使样品通过填充有凝胶的柱,凝胶将样品分离。

快速柱色谱的创始人Still和同事一直在使用中压色谱和短柱色谱来替代长柱色谱。他们决定将这两者结合起来,以克服长柱色谱费时、回收率低的缺点。

最初用于填充柱的凝胶是硅胶,它仍然被广泛使用。他们用气压推动溶剂通过硅胶柱,压缩柱。然后施加样品,并使用相同(可以不同,但通常相同)的溶剂使样品通过柱。然后收集纯化的组分或级分,整个过程大约需要5 - 10分钟。通常,小部分首先出现,大部分在最后洗脱。通过薄层色谱( TLC )板对收集的级分进行原始分析。

硅胶快速柱色谱自问世以来,在有机化学中得到了广泛的应用。然而,指导方针往往是松散的,受个人经验的驱使,或者在设置改变时没有很好地翻译。但是,有些事情还是成立的。增加样本量会导致分辨率降低。与高效液相色谱( HPLC )相比,快速柱色谱的分辨率已经是中等水平,但足以进行充分的分离,因此数量的增加只会使情况恶化。其次,最佳流速取决于柱的长度和宽度以及凝胶的性质。这是由于可用的板的数量,例如,更长和更窄的柱将提供更多的理论板的数量,从而影响流速。最后,分辨率受固定相的影响。如果固定相或排列在柱上的凝胶更均匀,并且具有更小的粒度,则它提供更好的分辨率。粒径越小,表面积越大,分辨率越高。

操纵所有这些因素以优化组分的纯度或回收率可能相当复杂,因为它们相互作用,但独立测试时具有不同的效果。例如,流动相选择性对拆分效果影响最大,但又取决于色谱柱容量。然后,这又会受到所选择的溶剂的影响。

因此,在开始任何真正的实验之前,需要测试或计算flash柱色谱中使用的设置。如果有来自TLC的数据,可以计算最佳设置,而不需要测试任何快速柱色谱设置。低薄层色谱延迟因子( Rf )提供更好的分离。使用这样的数据,可以计算所需的溶剂量,因为它们彼此成反比,并且两者都与柱空隙体积(样品加载前的柱中的溶剂)有关系。

在原来的方法中,防止色谱柱变干是非常重要的。然而,此后开发了一种更方便用户的替代物,称为干柱快速色谱法。这种方法已被首次使用的学生所采用,同时仍能产生与分析TLC质量相当的较好结果。原理相同,但柱中含有干硅胶。粉末状干凝胶通过抽吸被填充到柱中,最终得到大约1cm的用于溶剂和样品的均匀床。柱也通过抽吸洗脱,并在每一级分后干燥。


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