qRT-PCR中标准曲线制作及浓度梯度问题
要做qRT-PCR，但是不太清楚，1：浓度梯度是用来制作标准曲线的吗？2：是不是内参和每个目的基因都要制作各自的标准曲线？也就是说如果我要作10个基因的话，就要制作内参加目的基因共11个标准曲线？3：怎么确定最适合的cDNA模板浓度呢？4：有说作3个生物学重复，是怎么做？
是的，标准曲线法是绝对定量法
不是，既然用到了内参，就是相对定量了
反转录的时候按照试剂盒的要求转录特定质量的RNA（RNA的浓度可以通过分光光度计测定），反转完后按照推荐的比例稀释产物即可，一般确保你要的基因的Ct值在20~25比较理想
对于同一类生物样本，提取三份RNA（每份RNA都应包含若干不同的生物个体）并反转录，分别Q，这叫生物学重复；Q同一个基因的时候平行3个加样孔，这叫技术重复
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