线性浓度梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳色谱仪介绍
连续SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳色谱仪测定蛋白质分子量时，由于SDS和巯基乙醇的作用，天然蛋白质解离为亚基和肽链，测得的分子量不是天然蛋白质的分子量。为了弥补这一缺陷，可采用线性浓度梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳仪分离和鉴定蛋白质。
一、工作原理：
聚丙烯酰胺凝胶的浓度可在一定范围内（如4%～30%）连续改变，凝胶浓度和交联度不同可改变凝胶孔径。在线性浓度梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳（简称梯度凝胶电泳）中，蛋白质在电场中向着凝胶浓度逐渐增高的方向即孔径逐渐减小的方向迁移。随着电泳的继续进行，蛋白质受到孔径的阻力越来越大。zui初，蛋白质在凝胶中的迁移速度主要受两个因素的影响，一是蛋白质本身的电荷量，电荷越多，受到的电场力越大，迁移速度越快；二是蛋白质本身的大小，分子量越大，迁移速度越慢。当蛋白质迁移所受到的阻力大到足以完全阻止它前进时，低电荷密度的蛋白质将赶上与它大小相似但具有较高电荷密度的蛋白质。因此，在梯度凝胶电泳中，蛋白质的zui终迁移位置仅决定于它本身分子的大小，而与蛋白质本身的电荷量无关。在梯度凝胶电泳中，分子筛效应更为突出，故梯度凝胶电泳又称为分子筛电泳。
由于蛋白质的相对迁移率与其分子量的对数在一定范围内成线性关系，通过制作标准曲线，在相同条件下进行未知样品电泳，可测定其分子量。
二、特点：
1、具有使样品中各组分浓缩的作用。在样品大而稀的情况下，可在电泳过程中分几次加样，因为分子量大小不同的样品zui终都滞留在与其相应的凝胶孔中。
2、可提供更清晰的蛋白质谱带，可用于蛋白质的纯度鉴定。
3、可在一个凝胶片上同时测定分子量范围相当大的蛋白质。如浓度为4%～30%梯度凝胶可测定的分子量范围为5万～200万。
4、可直接测定天然状态蛋白质的分子量，不需解离为亚基。
5、主要用于测定球蛋白的分子量，而对纤维蛋白将会产生较大的误差。
6、由于分子量的测定仅仅是在未知蛋白质和标准蛋白质到达了被限定的凝胶孔径时，即完全被阻止迁移时才成立，电泳时要求电压足够高（一般不低于2000V），否则将得不到预期的效果。
