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流式细胞仪的使用操作流程(图)

2019.9.18

一.开机程序

1.检查稳压器电源,打开电源,稳定5分钟。   2.打开储液箱,倒掉废液,并在废液桶中加入400ml漂白水原液。打开压力阀,取出鞘液桶,将鞘液桶加至4/5满(一般可用三蒸水,做分选必须用PBS 或FACSFlow),合上压力阀。确实盖紧桶盖,检查所有管路是否妥善安置。   3.将FACSCalibur开关打开,此时仪器功能控制钮的显示应是STANDBY,预热5~10分钟。排出过滤器内的气泡。   4.如果需要打印,打开打印机电源。   5.打开电脑,等待屏幕显示出标准的苹果标志。   6.执行仪器PRIME功能一次,以排除Flowcell中的气泡。   7.分析样品时,先用FACAFlow或PBS进行HIGHRUN约2分钟。

做过分选后,每次开机后需冲洗管道:向分选装置上装上两个50ml离心管,不接通浓缩系统,摁下右下角白色按钮开始冲洗。待自动停止后接通浓缩装置,同上法冲洗一次。

二.预设获取模式文件(AcquisitionTemplateFiles)

1.从苹果标志中选择Cell Quest见一个新视窗,可利用此视窗编辑一个获取模式文件。   2.选取屏幕左列绘图工具中的Dotplot,绘出一个或多个DotPlots(点图)。从DotPlot对话框中选取Acquisition作为图形资料来源,并确定适当的x轴和y轴参数。   3.选取屏幕左列绘图工具中的Histogram,同上法可绘出Histogram(直方图)。   4.将此视窗命名后储存于FACStationG3BDApplicationsCELLQuestFolderEXP文件夹中,下次进行相同实验时可直接调用。

本计算机中已设定两个模式文件:ACQ和EXP,储存于FACStationG3BDApplicationsCellQuestEXP文件夹中,ACQ用于细胞DNA检测,EXP用于细胞表面标志分析。

三.用Cell Quest进行仪器的设定和调整

1.从苹果画面中选取CELLQuest,进入CELLQuest后在File指令栏中打开合适的获取模式文件。   2.从屏幕上方Acquire指令栏中,选取ConnecttoCytometer(快捷键:+B)进行电脑和仪器的连机。将出现的AcquisitonControl对话框移至合适位置。   3.从Cytometer指令栏中,开启Detectors/Amps、Threshold、Compensation、Status等四个对话框,并将它们移至屏幕右方,以便获取数据时随时调整获取条件。也可以用+1,2,3,4获得此四个对话框。   4.在Detectors/Amps对话框中,先为每个参数选择适当的倍增模式(amplifiermode):线性模式Lin或对数模式Log。一般进行细胞表面抗原 分析如分析外周血的淋巴细胞亚群时,FSC和SSC多以线性模式Lin测量,且DDMParam选择FL2,而FL1,FL2与FL3则以对数模式Log测量;分析细胞DNA含量时,FSC,SSC,FL1,FL2,FL3皆以Lin进行测量,且DDMParam选择FL2;分析血小板表型时,FSC,SSC,FL1,FL2,FL3等均以Log进行测量。


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