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报告基因检测概述

2020.6.15

报告基因检测是功能基因组学研究的一个重要手段,在真核基因表达调控研究和相关药物或蛋白筛选工作中,有广泛的应用。报告基因检测系统,是把顺式调控元件(即DNA非编码序列)与某一种非常容易被鉴定的蛋白(即报告基因产物)的编码序列连接起来,通过测定该报告基因在细胞内的表达产物的量或活性,来判断顺式调控元件的表达调控作用。这种间接的测定技术,提供了一种简单、有效、有时是唯一可行的检测体系。报告基因检测技术,涉及报告基因载体质粒构建、细胞转染、报告基因产物测定等方法。

 

理想的报告基因通常应具备以下特点:已被克隆和全序列已测定;表达产物在受体细胞中不存在(即无背景);细胞内其它的基因产物不会干扰报告基因产物的检测;基因产物在细胞内的含量能够实时反映该基因的转录活性状态;报告基因编码产物的检测方法应该快速、简便、灵敏度高而且重现性好。

 

目前实验室较为常用的报告基因有以下几种:荧光素酶(luc)、β-半乳糖苷酶(β-gal)、氯霉素乙酰转移酶(CAT)、β-葡萄糖苷酸酶(GUS)、分泌型碱性磷酸酶(SEAP)、绿色荧光蛋白(GFP)以及生长激素(hGH)等。其中荧光素酶报告基因具有检测速度快、灵敏度高、费用低等优点,得到了最为广泛的采用。在报告基因检测体系中,报告基因的活性与特异性刺激互相影响。因此除了主报告基因质粒外,通常还需包含另一种报告基因质粒,共转染同一细胞,以作为转染效率和细胞数量、状态的内参照,使主报告基因的结果归一化。


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