P81 磷酸纤维素膜吸附实验
实验方法原理
P81 膜具有离子交换的特性，在较大 pH 范围内带有负电荷。在低 pH 条件下（如在本方案中用于洗膜的 75 mmol/L 正磷酸），激酶分析中过量的 [γ-32P] ATP 并不与 P81 膜结合，而在此条件下带正电荷的磷酸化多肽可结合在膜上。
碱性蛋白质比酸性蛋白质更适合吸附在 P81 膜上。组蛋白与膜的结合力较强，因为它是强碱性的，而酪蛋白的结合力很差，几乎为零，因为它是较为酸性的蛋白质。
实验材料 样品
试剂、试剂盒 正磷酸丙酮
仪器、耗材 P81 磷酸纤维素膜500 ml塑料杯（其底被抗溶剂塑料或金属网替换）20 ml 闪烁瓶闪烁计数器
实验步骤
1. 将膜裁成 2 cm × 2 cm 大小的小块，在一端折叠，如图 17.7.1，用铅笔标记折线。将膜放置在一块大的无吸收性的物质上，如塑料、丙烯酸膜或铝箔包被的纤维板。
2. 从每个样品管中吸取 15 μl 或 30 μl 样品迅速滴在 P81 膜上。迅速将这些膜放置于带抗溶剂塑料或金属网底的 500 ml 塑料杯中（图 17.7.2）。
3. 将此杯放入盛有 75 mmol/L 正磷酸和搅拌子的更大烧杯中，搅拌 5 min。
4. 将已使用的正磷酸洗液倒入可收集放射性废料的容器中。重新将 75 mmol/L 正磷酸倒入大烧杯，搅拌 5 min 以上，重复以上清洗步骤，共洗 5 次。
5. 以丙酮充满大烧杯，洗 P81 膜 5 min，弃丙酮，使膜干燥。
6. 将每个 P81 膜放入 20 ml 闪烁瓶中进行 Cerenkov 射线计数。
注意事项
1. 通常为了确保信号能被检出，将 50%～75% 的反应终产物滴在P81膜上。
2. 如果杯中的塑料网不能抗溶则会被丙酮洗液溶解。
3. 假如想获得绝对 dpm 值且闪烁计数器可得 32P 的衰变曲线，可加入闪烁液计数。
