示踪细胞化学实验
由于高电子密度示踪剂很容易在细胞间隙扩散，并且如果细胞发生损伤，示踪剂还可进入到细胞中去，因此可利用此方法观察细胞连接及细胞损伤情况。常用的示踪剂有镧、过氧化物酶等。一般采用孵育法，即组织块在示踪液中孵育。也有人采用血管灌注法，但基底膜可阻止示踪剂进入细胞间隙或细胞内，因此一般只是在研究血管通透性改变时才用血管灌注法，大多数情况下用孵育法。
| 实验材料 | |
|---|---|
| 试剂、试剂盒 | |
| 实验步骤 | 1. 4％ 硝酸镧配制，PH 7.8，用 NaOH 调，边加边搅拌，使溶液呈乳白色。 2. 15～25℃ 条件下，组织用 1％～1.5％ 硝酸镧、2％～3％ 戊二醛-0.1 mol/L 二甲胂酸钠缓冲液前固定2～4 h。 3. 1％ 硝酸镧-二甲胂酸钠缓冲液漂洗 30 min 左右。 4. 1％ 硝酸镧、1％ 锇酸-二甲胂酸钠缓冲液固定 1～2 h。 5. 包埋、切片同常规。 |
| 注意事项 | 1. 由于示踪剂的渗透有限，修块时需注意，不要太深。 2. 示踪剂的渗透情况与孵育时的条件有关>如温度、时间等，因此实际应用还需根据具体情况摸索。 3. 由于镧有电子染色作用，所以一般情况下不需再染色，当然按照常规方法进行染色也可，对结果并无影响。 4. 组织或细胞在含_液体中的时间不宜过长，否则切片困难。 展开 |
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