技术和方案25 测定铺板效率
| 实验步骤 | 菌株的铺板效率是以培养基中可形成菌落的活力细胞的百分比衡量的（有时也称为克隆形成单位或 cfu)。测定铺板效率有以下两种简便的方法。 间接法1.测定培养物中的细胞密度，用 Coulter 计数仪测定培养物光密度或用血球计数板统计细胞个数。 2.确定要将细胞稀释至 103 个/ml 所需要的稀释系数。超声波处理细胞以便将菌块分散并按此稀释度将细胞稀释于蒸馏水中。 3.取 0.2 ml 稀释液涂布于 YPD 平板上，在所需温度下培养数天，计数菌落数目。将菌落数除以 200 即得到铺板效率，以小数表示（如 100 个克隆的铺板效率是 0.5)。 直接法1.取细胞密度为 106~107 个/ml 的培养物，超声波处理分散细胞。 2.涂布 0.2 ml 细胞悬液于 YPD 平板上，待液体干燥。 3.在所需温度下培养 16~24 h。 4.在四分体解剖显微镜下观察平板表面，有繁殖力的细胞将形成包含 50~100 个细胞的圆形微菌落，无繁殖力的细胞不会形成菌落但可形成由 1~10 个细胞组成的不规则集合。由此直接计算有繁殖力的细胞与无繁殖力的细胞数进而确定铺板效率。 展开 |
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